浅论磷酸甘油酸变位酶活性测定方法建立.docx

浅论磷酸甘油酸变位酶活性测定方法建立【摘要】目的建立一种适用于生化自动分析仪动力学测定磷酸甘油酸变位酶的方法并评价此方法的可靠性。为进一步探讨人体血清PGAM活性在急性心肌梗死和脑出血等疾病中的早期作用建立良好的方法基础。方法PGAM活性测定采用3-磷酸甘油酸为底物，经烯醇化酶等一系列偶联，以340nm波长在自动分析仪上测定，根据NADH吸光度变化可求出PGAM总活性。结果通过一系列参数的测定建立了良好的能适应生化自动分析仪的PGAM活性测定方法。结论全自动酶偶联法操作简单、测定快速、稳定性好，灵敏度和精确度高，抗干扰性强，可在全自动生化分析仪上应用。【关键词】磷酸甘油酸变位酶心肌梗脑出血动力学法Abstract：ObjectiveToestablishamethodapplicabletoassayPGAMinanautomaticbiochemicalanalyzerdynamicsandtoevaluatethereliabilityofthismethod.TofurtherexploretheearlyrolethathumanserumPGAMactivityplaysinacutemyocardialinfarctionandcerebralhemorrhage,andotherdiseasesandasaresultfindoutadesirablemethod.MethodsTheactivitywasdeterminedby3-phosphoglycerateassubstrate,theenolaseandaseriesofcouplingto340nmwave-lengthautomaticanalyzerinthedeterminationoftotalactivitycouldbederived.ResultsThroughaseriesofparametersdetermination,agoodautomaticbiochemicalanalyzertothePGAMassaywasAutomatic-couplingmethodhastheadvantageofsimplicity,fast-determination,goodstability,highaccuracyandsensitivity,andstronganti-interference,availabilitytotheautomaticbiochemicalanalyzer.Keywords：PGAM;myocardialinfarction;cerebralhemorrhage;kinetic磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglycericacidmutase，PGAM)广泛分布人体全身各组织器官，主要定位于细胞溶胶中。PGAM酶是糖代谢与分解酶系之一，所催化的反应是糖分解代谢中间环节，现知PGAM是不同基因指导合成的M和B亚基组成的二聚体。聚合成MM、BB、MB三型，MM主要存在于骨骼肌和心肌;BB型主要存在于脑、肝、肾和红细胞;MB型主要存在于心肌。MM、BB、MB分子量为60000。所以建立一套能适用于生化自动分析仪，并能在临床上应用的动力学测定PGAM活性方法，对于临床实验诊断学有重要意义［1］。1材料与方法试剂与仪器R1：三乙醇胺-盐酸缓冲液(，84mmol／L)，1mmol／LMgSO4，mmol／LNADH，mmol／LADP，mmol／L2，3-二磷酸甘油酸，ku／L乳酸脱氢酶，ku／L丙酮酸激酶，ku／L烯醇化酶［2］。R2：三乙醇胺-盐酸缓冲液(，84mmol/L)mmol／L3-磷酸甘油酸盐。仪器贝克曼SYNCHRON-LX20全自动生化分析仪［2］121-123。实验对象对照组为锦州市中心血站健康体检者，男50名，女50名；疾病组脑出血患者54名，急性心肌梗死患者。实验方法测定原理3-PGAPGAM2-PGA烯醇化酶磷酸烯醇式丙酮酸PKADPATP+丙酮酸LDNADH乳酸+NAD+因为NADH在340nm处有强吸收峰，吸光度下降速率与待测样品中PGAM成正比关系，监测340nm吸光度下降△A/min，求得酶活性［3］。精密度试验活性高中低3份活性分别为74、37、U/L不同的PGAM新鲜混合血清，短时间各测定10次分别计算批内、s及CV；连续5日，将高中低活性PGAM新鲜混合血清标本插入常规标本中测定，计算批间、s及CV［4］。PGAM线性范围取PGAM混合血清，稀释成不同浓度，使样本含量依次为1/10、1/5、2/5、3/5、4/5、5/5进行测定。回收率试验和稀释实验为了证明方法的正确性，本实验依靠回收率试验和稀释试验证明。取PGAM为U/L正常人血清和74U/L病人血清分别加10U/L和20U