浅谈荧光定量PCR检测HBV.docx

浅谈荧光定量PCR检测HBV【摘要】目的：探讨荧光定量PCR检测HBV-DNA载量与乙肝病毒标志物常见模式的关系。方法：回顾性分析同时检测乙型肝炎病毒和荧光定量PCR255例患者，统计HBV–DNA检测含量值和酶联免疫吸附检测的HBV–M模式值，进行对比。结果：53例大三阳标本中,HBV–DNA阳性47例平均拷贝数为2.25×107/ml;在7例HBsAg、HBeAg标志物阳性的标本中,HBVDNA阳性5例,平均拷贝数5.40×106/ml;在57例小三阳标本中,HBV-DNA阳性者为24例,平均拷贝数为7.69×10/ml;而在122例HBV-M标志物全阴性的标本中,仍有3例检出HBV-DNA阳性,平均拷贝数为4.54×10/ml。结论在各种HBV标志物模式中,以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高,荧光定量PCR检测HBV-DNA载量可表达HBV感染和复制状态。【关键词】HBV-DNA载量；荧光定量PCR；HBV–M模式；标志物中国有13亿慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者,是传染性肝炎的高发地区。其中约有2000万是需要抗病毒治疗的慢性进展性肝病患者［1］。目前HBVM模式感染复制情况难以判断,实时荧光定量PCR的应用,使HBV-DNA检测得到准确量化,为临床医生对乙肝的诊断、治疗和预后判断提供可靠依据。为进一步了解HBV-DNA定量检测与乙肝患者HBV标志物(HBV-M)之间的关系,对同步检测乙型肝炎病毒和荧光定量PCR255份血清标本检测结果进行比较和分析如下。1资料与方法标本来源:255例标本均为两年来我院检测HBV-M，并同时做HBV-DNA检测的患者。仪器与试剂:HBV-M:仪器为RT-2100C酶标仪(深圳雷杜)和洗板机：型数显电热恒温水温箱和ZW-A型微量振荡器,HBsAg试剂。HBV-DNA的检测仪：美国生产的ABI7300型实时荧光定量PCR仪。试剂盒由广州中山医科大学达安基因诊断中心提供PCRHBV试剂盒。检测方法:HBV-M采用ELISA法,HBV-DNA采用荧光定量PCR技术,严格按试剂盒说明操作并执行质控。统计学处理采用统计软件包进行数据处理。两样本均数分析采用t检验,P0.05为差异有统计学意义。如表1。2结果255例标本按HBV-M常见模式分为6个类型,分别统计HBV-DNA检测阳性率及HBV-DNA含量,进行结果统计时,拷贝数1000的标本不参加均值计算,结果见表1。结果显示：255例HBV-DNA载量高于1000拷贝/ml血清的病例中有85例。表1255乙型肝炎血清HBV-M模式与HBVDNA定量结果的对比3讨论回顾性分析同步检测乙型肝炎病毒和荧光定量PCR255例患者，统计HBV–DNA检测含量值和酶联免疫吸附检测的HBV–M模式值，HBV-M阳性133例;HBVDNA阳性85例。其中53例模式1血清标本中检测到HBVDNA阳性48例,检出率达%,模式2中HBVDNA检出率为%明显高于其它各组(P0.05),显示HBV复制与HBeAg存在某种联系［2］;但,HBeAg阳性组60例中仍有6例(10%)HBVDNA检测结果阴性,亦有可能与E系统检测的试剂质量有关［1］。在57例模式3中,有24例检出HBVDNA,检出率达%,据导这类乙肝阳性率差异较大,从13%～63%不等［3］。这可能与HBVDNA检测方法、被研究人群等因素有关。这种类型病人不论是乙肝病毒复制终止,还是复制水平降低,都有一定的传染性［4］。表中第8种模式乙肝标志物全部阴性的122例血清中,HBV-DNA阳性的有3例(2.46%),可能是HBV-DNA先于其它血清标志物于血中出现,也可能是在部分HBV感染人群中HBsAg呈低水平存在,而采用的ELISA法对这类人群易造成漏检。在各种HBV标志物模式中,以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高,荧光定量PCR检测HBV-DNA载量可表达HBV感染和复制状态。荧光定量PCR法灵敏度高、特异性强、结果准确,能反映HBV真实感染和复制状态,对乙肝的治疗方案选择、疗效观察、预后判断具有重要的指导意义。参考文献［1］丁友法,王伟.杂交酶联定量PCR检测HBV-DNA的初步应用［J］.上海医学检验杂志,2002,17(3):179-1802［2］骆抗先.乙型肝炎基础和临床［M］2版.北京:人民卫生出版社,2001.350.［3］陶其敏.如何看待病毒性肝炎的基因诊断［J］.中华检验医学杂志,2002,25(2):69［4］曹文飞.酶联免疫测定的干扰因素与对策［J］.中国实验临床免疫学杂志.1998,10(3):60