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CD34+细胞分离及其体外扩增CD34+细胞CD34+细胞在骨髓,脐带血以及外周血中都有存在。用常规方法普通难以有效分离。原因主要在于CD34+抗原表示拷贝较低,抗CD34+亲和力低,表示CD34+抗原细胞存在于一个不均一本底细胞群中,且数量极少。分离CD34+细胞方法流式细胞分选(fluorescenceactivatedcellsorting,FACS)可取得高纯度CD34+细胞,不过因为得量较少,受无菌试验条件等方面限制,所以应用较少。细胞物理参数系统分离CD34+细胞得率较低,而且需要提供足够细胞量。当前惯用于分离CD34+细胞方法主要是免疫吸附法(systemsbasedonimmunoadsorption)。尤其是用免疫磁珠吸附分离(immuneadsorptiononferromagneticbeads)方法应用更为广泛。CD34+细胞分离方法比较免疫磁珠吸附分离CD34+细胞试验材料:1.脐带血,外周血及骨髓标本;2.PBS缓冲溶液;3.10%BSA;4.10mmol/LEDTA;5.淋巴细胞分离液;6.MACS磁性分离仪;7.MACS分离试剂盒;操作步骤分离结果体外培养脐血单个核细胞与CD34+富集细胞比较方法1.Ficoll密度梯度离心搜集单个核细胞;2.免疫磁珠分离纯化CD34+细胞.3.MNC接种密度为5*105cells/ml.CD34+细胞为2*104cells/ml于24孔板,每七天取样计数,集落检测和流式细胞分析.结果MNC扩增到第28天,细胞总数开始呈下降趋势,而另一组则连续扩增8周。在前4周中,MNC扩增倍数远低于CD34+富集细胞造血干/祖细胞集落密度分析造血干/祖细胞总集落扩增分析小结讨论与总结谢谢