粘膜疫苗与活载体疫苗.pptx

粘膜疫苗与活载体疫苗粘膜免疫粘膜免疫系统组成粘膜免疫系统存在着功效性分离位点粘膜免疫肠道集合淋巴结(PP)反抗原摄取肠道集合淋巴结引发IgA抗体反应肠道集合淋巴结引发IgA抗体反应怎样针对粘膜免疫诱导位点抗原递呈和激活B,T细胞亚群最正确？新粘膜免疫佐剂—神经肽新粘膜免疫佐剂—神经肽怎样针对粘膜免疫诱导位点抗原递呈和激活B,T细胞亚群最正确？活载体疫苗构建活载体疫苗细菌载体释放粘膜疫苗活载体－－沙门氏菌释放粘膜疫苗活载体－－沙门氏菌释放粘膜疫苗活载体－－沙门氏菌卡介苗卡介苗共栖菌当前用于表示外源病毒蛋白载体病毒包含：痘病毒(痘苗病毒和宿主特异性痘病毒)、腺病毒、疱疹病毒、小RNA病毒等痘苗病毒含有宿主范围广、增殖滴度高、稳定性好、基因组容量大、含多个非必需区基因等特，所以，有利于进行基因工程操作，易于构建和分离重组病毒，适于插人多个外源基因(可达0kb)，对插入外源基因有较高表示水平。禽类痘病毒，因为用该病毒接种哺乳动物后，能够引发顿挫型感染，能够连续表示外源基因，而且不影响再次接种，日渐引发大家关注。马立克氏病毒gB基因鸡痘活载体疫苗免疫效果极佳，免疫鸡用强毒攻击100%不发病，用超强毒株击90%不发病。病毒感染广谱性，使其它痘苗病毒活载体疫苗应用受到限制。腺病毒载体对外源基因容量较小，但它含有独特优点:①腺病毒比较安全。②腺病毒靶细胞范围广，不但能感染复制分裂细胞，而且能感染非复制分裂细胞。③腺病毒轻易制备，对热不敏感，在适合培养系统中呈高滴度增殖。④腺病毒能够在肠道及呼吸道繁殖，能诱导粘膜免疫，能制成药囊经口服路径接种以预防消化道及呼吸道感染。(5)Ad2,Ad5等开启子较强，能高水平表示外源基因，尤其是换以更强开启子。大多数腺病毒载体就是以Ad2和Ad5为基础构建。重组腺病毒最大包装量约为野生型105%，即外源基因容量为20kb。要插入大片段外源基因就必须缺失一段腺病毒基因组。普通缺失位点有三处，即El,E3以及E4与反向末端重复之间区域。E3区可去除约2.2Kb构建成有复制能力非缺点型载体，允许插入外源基因最大长度为4.0Kb。普通不需要加基因表示调控元件，利用腺病毒本身调整元件E3开启子在感染早期有效表示。缺失E1区人腺病毒必须在特殊工程细胞中或非缺失腺病毒辅助下才能复制增殖，所以称为病毒缺点型载体。“第一代腺病毒载体”(应包含E3或El+E3同时缺失)当前应用最为广泛，因为缺失复制必须区，腺病毒只能在表示El基因产物细胞中复制。E1区可被去除5.5Kb，外源基因插人容量可达7.5Kb。常规构建方法是在E1区插入一个表示盒，其中包含开启子，外源基因和polyA序列。几乎全部哺乳动物都存在疱疹病毒，一些疤疹病毒对畜牧业组成严重危害，如伪狂犬病毒。疱疹病毒基因组较大，约150kb左右，预计含有约70个编码基因，其中最少有20%基因是非必需基因，可容纳多个外源基因插入。许多疱疹病毒经粘膜路径感染，构建载体活疫苗可经粘膜路径提呈抗原，诱导特异性粘膜免疫。疱疹病毒活载体主要有单纯疤疹病毒、伪狂犬病毒、火鸡疤疹病毒、牛疤疹病毒I型、马疤疹病毒I型和传染性喉气管炎病毒等几乎全部哺乳动物都存在疱疹病毒，一些疤疹病毒对畜牧业组成严重危害，如伪狂犬病毒。疱疹病毒基因组较大，约150kb左右，预计含有约70个编码基因，其中最少有20%基因是非必需基因，可容纳多个外源基因插入。许多疱疹病毒经粘膜路径感染，构建载体活疫苗可经粘膜路径提呈抗原，诱导特异性粘膜免疫。疱疹病毒活载体主要有单纯疤疹病毒、伪狂犬病毒、火鸡疱疹病毒、牛疱疹病毒I型、马疱疹病毒I型和传染性喉气管炎病毒等火鸡疱疹病毒活载体，是禽病毒基因工程研究中比较活跃领域。用该载体表示新城疫病毒F和HN基因，由此构建重组病毒接种鸡后，免疫鸡可抵抗新城疫病毒和马立克氏病毒强毒攻击。用该载体表示马立克氏病毒gB基因，处理马立克氏弱毒苗不能冻干带来不便。用伪狂犬病载体表示猪瘟病毒El基因，免疫猪后既可预防伪狂犬病又可预防猪瘟。小RNA病毒科中脊髓灰质炎病毒(PV)Sabin疫苗株在实际应用中证实安全、可口服，而且易增殖，感染滴度高。能够将Pi区中个别氨基酸缺失掉，代之以外源性病毒保护性抗原决定族，形成嵌合病毒粒子。脊髓灰质炎病毒作为载体与前面所述病毒活载体有所不一样，前述载体系将外源性保护性抗原分泌到载体病毒粒子以外，而脊髓灰质炎病毒载体表示外源性病毒蛋白则以嵌合形式存在于载体病毒颗粒表面。以负链RNA病毒，如流感病毒，作为载体研究亦已尝试多年，并取得重大进展。流感病毒RNA没有感染性，不能自行复制。流感病毒核糖核蛋白体(RNP)重组及转染系统，即用提纯病毒转染进已被辅助病毒感染细胞。重组流感病毒RNA表示质粒中，流感病毒非结构蛋白基因被外源基因反义序列取代，当质粒转录后，重组病毒RNA与核蛋