植物组织培养第四章胚胎培养和离体授粉.pptx

第四章胚胎培养及离体授粉目的与要求了解植物胚培养类型、过程、培养条件，以及胚培养的应用。了解植物胚乳培养过程和培养条件，了解胚乳培养在实践中的应用。认识植物胚珠和子房培养方法及其在生产上应用。具备胚胎培养基本认知，有进行各类胚胎培养的基本能力。一、胚胎培养概念胚胎培养是将植物的胚胎与母体分离，培养在已知化学成分的培养基上。二、胚胎培养应用：1、解决育种中实践中遇到的问题；2、研究胚胎发育过程中与胚发育有关的内外因素。三、胚胎培养类型幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养、子房培养植物组织培养第四章胚胎培养和离体授粉，您现在浏览的是!1、离体胚培养时期自养期：能在基本的无机盐和蔗糖培养基上生长。异养期：幼胚由胚乳及周围的组织提供养分。2、离体胚培养类型⑴成熟胚培养（子叶形成以后）⑵幼胚培养（子叶形成之前）成熟或未成熟子房——70%酒精浸数S——0.1%升汞或饱和漂白粉浸10-30min——无菌水冲洗——剖出胚珠——取出完整胚——接种在培养基上。一般采用固体培养法。（同时配制两种培养基）培养条件：20-30℃，2000Lx。10-14h2、成熟胚培养过程种子——95%酒精消毒——选取完好种子——70%酒精浸数S——0.1%升汞或10%次氯酸钠浸泡——无菌水冲洗——种子培养几天——剥离种胚——接种在培养基上。培养条件：黑暗培养、25℃2、糖类幼胚需要蔗糖浓度较高作用：调节培养基渗透压，作为碳源和能源，防止幼胚早熟萌发。成熟胚2%，幼胚8-12%。培养过程中，转移到蔗糖水平低的培养基上。3、氨基酸和维生素加入氨基酸，能刺激胚的生长。加单一氨基酸时，以谷氨酰胺最好。维生素对幼胚是必须的，对已萌发的胚，可能有抑制作用。（二）培养条件1、PH5.2-6.0，水稻5.0,柑橘5.82、温度25-30℃左右3、光照黑暗或弱光4、培养基形态液体适合幼胚培养，固体适合成熟胚培养四、胚培养的应用1、远缘杂交中应用2、克服珠心胚的干扰，提高育种效率3、缩短育种周期4、测定休眠种子的萌发率5、理论研究中应用第二节胚乳培养胚乳培养—将胚乳从母体上分离出来，在无菌条件下人工培养，使其生长发育成为幼苗的过程。一、培养过程1、胚乳外植体的制备⑴胚乳较大块组织的种子，可直接将种子表面灭菌，无菌条件下除去种子的外皮即可培养。⑵桑寄生类植物，胚乳被流质层包裹，不好取出胚乳，可先将种子表面灭菌，无菌条件下剥开种皮，去掉粘性流质层，取出胚乳。桑寄生科蔷薇亚纲的一科。半寄生性灌木，稀草本，寄生于木本植物的枝上，少数为寄生于根部的陆生小乔木或灌木。花以造孢细胞发育成的胚囊所代替。主要产于世界热带地区，温带分布较少。中国，大多数分布于华南和西南各省区；有些种类可供药用，如桑寄生、广寄生、槲寄生等。根据花的形态、花粉粒和果的构造不同，分为桑寄生亚科和槲寄生亚科。植物胚乳可分为两大类：被子植物胚乳——被子植物中它是双受精的产物，胚乳属于三倍体。裸子植物胚乳——裸子植物很特殊，它的胚乳在受精前就已形成。裸子植物的胚乳为是单倍体。4、胚乳植株染色体数目的检查取胚乳培养植株根尖、幼叶或胚乳愈伤组织，0.2-0.5%秋水仙素（或对二氯苯饱和溶液）25℃下处理4-8h，流水冲洗，卡洛氏液或FAA固定，1mol盐酸60℃水溶下水解10min，染色、压片、观察。二、影响因素（二）培养条件1、ph4.5-6.32、光照10-12h黑暗和光照交替3、温度24-26℃二、影响因素（四）胚乳发生类型和发育程度1、发生类型：核型：精核与极核受精后，只以核的分裂方式增殖。占61%细胞型：受精后，以细胞分裂方式增殖。混生目型：两种方式混生增殖。2、发育时期：早期：愈伤组织诱导率低旺盛生长期：最容易诱导产生愈伤组织成熟期：诱导率很低。水稻和桑寄生科的一些木本植物例外胚乳培养中，旺盛生长期是取材的最适时期。四、胚乳培养的应用培养胚乳的首要目的是为了直接获得三倍体植株。三倍体——六倍体——生产倍性多样性——筛选非整倍体植株杂种胚乳—附加系和换代系—遗传育种二、子房培养将子房从母株上摘下，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。根据培养的子房是否授粉分为：授粉子房培养未授粉子房培养2、子房的培养固体和液体培养基均可，26℃，50-60%相对湿度，光照16h。N6，MS，BN，Nitsch培养基（二）培养子房的发育子房性细胞——愈伤组织或胚状体——单倍体植株子房体细胞——愈伤组织或胚状体——二倍体植株第四节植物离体授粉一、离体授粉的类型1）活体子房内授粉：指被授粉的子房并不离体，仍然活在植株上，对其用花粉悬浮液进行授粉，使活体子房发育并形成成熟种子的过程。①步骤：确定供试植物的开花和花药开裂时间；对母本花蕾去雄并套袋；采集父本花粉；将花粉引入子房。②花粉粒引入子房有两种方法：直接引入法和注射