植物胚胎培养及离体授粉.pptx

第六章植物胚胎培养及离体授粉植物胚胎培养（EmbryoCulture）概念:
指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植物的技术。包括胚培养（成熟胚培养、幼胚培养）、胚珠培养、子房培养、胚乳培养、试管受精等类型。1904年Hanning最早成功培养萝卜和辣根的胚。节植物胚培养牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖
Matureembryocultureandrapidpropagationoftreepeony二、胚培养的应用
1、克服远缘杂交不亲和性
如利用“胚胎拯救（Embryorescue）”技术获得远缘杂种。
2、打破种子休眠，缩短育种周期
3、提高种子萌发率
特别是对于一些长期营养繁殖的植物种子。植物胚胎发生过程：
原胚－球形胚－心型胚－鱼雷胚－子叶胚
黄瓜远缘杂种幼胎培养2、碳水化合物：
糖的作用：
调节渗透压；碳源；防止幼胚早萌。
渗透压的保持对于幼胚培养相当重要。最适蔗糖浓度随着胚的发育时期而降低。
4、天然提取物及某些蛋白制品；
银杏幼胚培养中添加银杏胚乳有促进作用（1934）；曼佗罗幼胚培养中发现添加椰子乳能很好的促进幼胚的发育(200-500um的幼胚)（1941）。
此外，大麦胚乳、麦芽提取物、酵母提取物、水解酪蛋白等都能促进幼胚的发育。（三）胚柄
在幼胚培养中，带有胚柄结构有利于幼胚的生长。但一般较难与胚一起分离出来。
胚乳在被子植物中是双受精的产物，由极核和雄配子结合成的三倍体组织。
而裸子植物胚乳在受精前形成，为单倍体。
仅40多种植物进行胚乳培养研究，20种获得再生植株，如猕猴桃等。多存在混倍现象。一、胚珠培养:
概念：在人工控制的条件下，对胚珠进行离体培养使其生长发育形成幼苗的技术。
1942首次在兰花中尝试成功，缩短了从授粉到种子成熟的时间。1980年成功培养了未授粉的非洲菊、烟草的胚珠，获得了单倍体植株。
植物花的结构图示（一）胚珠培养的意义:
防止杂种胚早期败育，获得杂种植株；
受精前胚珠培养，可作为试管受精的基础；
未受精胚珠培养，能培养获得单倍体植株，用于单倍体育种。
2、培养基的影响：
植物激素：细胞分裂素对授粉胚珠发育常有促进作用。
有机物：添加有机附加物可以促进授粉胚珠的发育。
蔗糖浓度：3-12%，通常5%，高浓度利于孤雌生殖。（二）未授粉子房培养应注意的问题：
1、材料的选择：发育时期（接近成熟胚囊易于成功）
2、培养基：基本培养基（MS、N6、B5等）、植物激素（配合使用）、蔗糖浓度（3-10%）
3、培养方式：直插优于平放。单倍体胚有多种，可以是卵细胞、助细胞或反足细胞等。1、离体柱头授粉
2、离体子房授粉
3、离体胚珠授粉四、离体授粉的方法:

1、试验材料的选择：以子房较大胚珠较多的植物较易成功。
五、影响离体授粉受精的因素:
1、外植体
2、培养基
3、培养条件
台湾红豆杉成熟胚培养2、幼胚培养
对发育早期的胚进行培养。培养技术和条件要求较高。
以两种方式生长：继续进行胚性生长；早熟萌发。三、幼胚培养方法
1、材料的选择与灭菌
确定授粉后天数与胚胎发育的相应关系，对于远缘杂种胚，要在其夭折前培养。
2、幼胚的分离及培养
分离：先取出胚珠，剥离珠被，取出完整的幼胚，后培养。
培养：胚离体培养发育时期分为异养期和自养期。在心形期转入自养生长。对于难培养的幼胚，可利用胚乳看护培养。四、影响胚培养的因素
（一）培养基
1、无机盐：
成熟胚培养基相对简单，如White。幼胚培养有MS、B5等，可使K+、Ca2+水平稍高。
胚发育早期要求较高的的渗透压，而随着胚的发育逐渐降低。3、植物激素的作用：
成熟胚一般不需要外源激素即可萌发。但激素能促进休眠胚的萌发。
幼胚需要外源激素，应保持外源激素与内源激素的平衡。过低则不能促进生长，过高则易导致幼胚脱分化形成愈伤。（二）环境条件
1、温度：
多数为25-30℃，因植物种类有所差别。
2、光照：
一般认为黑暗或弱光条件较为合适。

胚乳培养的应用：由于幼胚分离难度大，而胚珠分离则相对容易，在幼胚培养时常采用胚珠培养。

分为两种类型：受精胚珠培养 未受精胚珠培养植物胚珠结构图示（二）胚珠培养方法:
1、材料的选择和灭菌：
未授粉胚珠：开花前1-6天，
授粉胚珠：授粉后1-120天不等，较晚时期有利于胚的发育。
灭菌：先对子房或外表组织消毒灭菌后，后取出胚珠培养。
3、胎座和子房对胚珠培养的影响：带有胎座或子房组织的胚珠相对较易培养。
4、胚发育时期的影响：一般来说，合子或早期原胚期的胚珠较难剖取和培养，对培养基的成分要求也较严格。（一）子房培养的意义:
获得杂种植株；
未授精子房培养为试管受精提供技术基础；
未受精子房培养能获得获得