细胞化学染色省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

细胞化学染色检验一、概述二、细胞化学染色基本方法三、临床应用1、概念：细胞化学染色是细胞学和化学相结合而成一门科学，以细胞形态学为基础，结合利用化学反应原理对血细胞内各种化学物质（包含酶类、脂类、蛋白质、糖类、铁、核酸等）作定性、定位、半定量分析方法。2.细胞化学染色目标（1）辅助判断急性白血病类型（2）辅助血液系统等疾病诊疗与判别诊疗3.细胞化学染色基本步骤：包含固定、显色反应、复染。（1）固定：为了保持细胞结构及化学成份稳定性而选取方法。依据染色目标，最惯用固定剂有甲醛、甲醇、乙醇等。（2）显色：经过不一样化学反应，最终形成稳定有色沉淀，使被监测化学物质显示出来。包含偶氮偶联法：如NAP、ACP及各种脂酶染色普鲁氏蓝反应：如铁染色雪夫（shiff）反应：如PAS染色联苯胺法：如POX染色（3）复染：使各种目标细胞能显示出来更便于观察过氧化物酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色糖原染色非特异性酯酶染色特异性酯酶染色骨髓铁染色1、原理：poxH2O2O联苯胺联苯胺蓝+亚硝基铁氰化钠2.试剂(1)联苯胺酒精溶液：取0.3g联苯胺加亚硝基铁氰化钠饱合液（36%）1ml,再加95%乙醇至100ml，存在于棕色瓶中，可存一年。(2)稀过氧化氢（新鲜配制）：取50ml蒸馏水加30%H2O21滴。（3）瑞吉氏复染液3、染色方法1、新鲜干燥涂片加联苯胺酒精溶液10滴，覆盖整个髓膜，固定1-2min。2、再加等量稀H2O2，混匀后染色4－5min,勿倒去染液直接流水冲洗。3、瑞氏染液复染。4、注意事项（1）H2O2要新鲜配制，注意有效性（2）标本要新鲜，最长不超出一周，时间长了酶活性减弱。（3）POX染色后，一定要冲洗洁净，不然染料堆积或浮于表面，影响瑞氏染色结果观察。5、结果判定：中性粒细胞杆状及分叶核呈强阳性是染色成功标志(设对照片）。在细胞胞浆中出现蓝绿色或蓝棕色颗粒为阳性反应。1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.晚幼红细胞，呈阴性；3.单核细胞，呈弱阳性；4.浆细胞，呈阴性14急性粒细胞白血病（M2a)POX染色原始粒细胞均呈阳性急性淋巴细胞白血病POX染色1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；其它原始淋巴细胞均呈阴性急性早幼粒细胞白血病POX染色１.原始红细胞，呈阴性；其它早幼粒细胞均呈强阳性急性单核细胞白血病POX染色1.中性成熟粒细胞，呈强阳性；2.原始单核细胞，呈阳性；3.原始单核细胞，呈弱阳性；其它原幼单核细胞呈阴性6、临床意义（1）正常分布粒系:早期原粒阴性，晚期原粒及以下各阶段呈不一样程度阳性。单核系:早期原单阴性，其它阶段皆呈弱阳性。淋巴、红系、浆细胞、巨核均呈阴性。（2）急性白血病判别诊疗幼稚细胞POX阳性率≥3%：急非淋（AML)幼稚细胞POX阳性率＜3%：急淋（ALL)（二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（偶氮偶联法）223.操作步骤1、新鲜、干燥外周血或骨髓涂片（标本片及对照片）加固定剂作用30秒（染缸），水洗待干；2、滴加作用液，室温染色15min，水洗待干；3、1%中性红复染1min4.注意事项(1)重氮盐以坚固蓝RR盐为最正确；(2)坚固蓝RR盐应适量：过多易造成染色失败，过少使反应减弱；(3)每次都要做阳性对照；(4)作用液新鲜配制，配好后要马上使用5.结果观察:(对照片成熟中性粒细胞中出现棕黑色颗粒为阳性细胞，说明染色成功)正常人除成熟中性粒细胞NAP可见阳性外，其它血细胞均为阴性。且正常阳性率＜40%，积分值30～130分。6.NAP阳性结果及积分判断标准中性粒细胞碱性磷酸酶染色1.中性成熟粒细胞（+）；2.中性成熟粒细胞（++）；3.中性成熟粒细胞（+++）；4.中性成熟粒细胞（++++）；5.淋巴细胞（-）28297.临床意义增高：细菌感染、类白、AA、急淋、慢粒急变、骨髓增殖性疾病，恶性淋巴瘤。降低：慢粒、急粒、PNH、MDS、恶组8.判别诊疗慢粒与类白：前↓；后↑。PNH与AA：前↓；后↑。急粒与急淋：前↓；后↑。MDS与慢性再障：前↓；后↑。病毒感染与细菌感染：前者无显著改变，后者↑。恶组与反应性组织细胞增多：前↓；后↑。（三）酯酶染色概述1.原理（偶氮偶联法）氯乙酸AS－D萘酚AS－D萘酚+重氮盐(坚固蓝B盐)2.试剂：（1）固定液：10％甲醛甲醇溶液（2）作用液（基质液）氯乙酸AS－D萘酚5mg丙酮5-8ml磷酸盐缓冲液19ml坚固蓝B盐10mg（3）复染液：1%中性红3.染色方法（1）固定：10%甲醛甲醇液固定30秒，水洗晾干（2）滴加作用液37℃孵育30min，水洗（3）1%中性红复染1min，水洗晾干镜检。4.注意事项：1.氯乙酸AS-D萘酚溶液应避光，4℃冰箱保留，变黄或混浊即失效。2.染色温度37℃效果最好5.结果判断中性分叶核粒细胞胞浆中见细小，弥漫分布蓝色颗粒为染色成功标志。6.临床意义粒系除