PRDC基因芯片诊断方法的建立.docx

编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第页共NUMPAGES5页第PAGE\*MERGEFORMAT5页共NUMPAGES\*MERGEFORMAT5页猪呼吸道疾病综合征基因芯片诊断方法的建立与应用高淑霞2,4吴时友1尹燕博1庄文忠3牛钟相2(1.山东澳兰生物工程研究院,山东青岛261001;2.山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;3.山东省农业厅,山东济南250013;4.山东省农业科学院山东济南250100)摘要：根据Genbank发表的核酸序列，分别设计合成流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病病毒的特异引物,应用PCR（或RT-PCR）分别扩增各病毒的特异片断，并克隆到pMD18-TSimpleVector构建重组质粒，用于各病毒探针的制备。将各探针按一定的阵列点加到硝酸纤维素膜上，制备成低密度基因芯片。在多重PCR过程中，用生物素标记的dUTP(Bio-11-dUTP)对待检样品进行标记，扩增产物与基因芯片杂交，最后用扫描仪进行读片和分析。对临床疑似病例检测结果表明，该方法可以同时检测待检样品中4种病毒的存在情况，与PCR方法相比，显示了较高的灵敏度。该方法的建立，为批量样品的检测和猪呼吸道疾病综合征流行病学调查提供了一种快速、灵敏和高通量的手段。关键词：呼吸道疾病综合征；基因芯片；多重PCR；核酸杂交LowDensityDNAarrayforDiagnosingPorcineRespiratoryDiseaseComplexGAOShuxia2,4,WUShiyou1,YINYanbo1,ZHUANGWenzhong3,NIUZhongxiang2(1ShandongOlandInstituteofBioengineering,Qingdao261001;2CollegeofAnimalScienceandTechnology,ShandongAgricultureUniversity,Tai’an2710183.ShandongAgricultureoffice,Jinan250013;4ShandongAcademyofAgricultureScience,250100)Abstract：BasedonthepublishednucleotidesequencesofInfluenzaAvirus,Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,Porcinecirocovirus-2andPorcinepseudorabiesvirus,4pairsofprimersweredesigned.AndconservedDNA(orcDNA)fragmentsofthe4virusesobtainedbyusingPCR(orRT-PCR),wereligatedwithpMD18-TSimpleVectortoconstructrecombinantplasmidforDNAprobepreparation.TherecoveredDNAprobeswerespottedonlocatedsitesonnitrocellulosefiltertopreparelowdensityDNAarray.DuringtheprocessofmultiplexPCR,sampleswerelabeledbyBiotin-11-dUTP.ThenthelabeledPCRproductswerehybridizedwithDNAarrays,andthehybridizationsignalswerescannedandanalyzedbyscanningdeviceandsoftware.TheresultsshowedthatthisDNAarraycouldidentifyanddistinguishthe4virusesinsamplessynchronouslyandwasmoresensitivethanPCRmethod.Thismethodcanbeuseforlabdia