PRDC基因芯片诊断方法的建立.docx

编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径学海无涯苦作舟页码：猪呼吸道疾病综合征基因芯片诊断方法的建立与应用高淑霞24吴时友1尹燕博1庄文忠3牛钟相2(1.山东澳兰生物工程研究院山东青岛261001;2.山东农业大学动物科技学院山东泰安271018;3.山东省农业厅山东济南250013;4.山东省农业科学院山东济南250100)摘要：根据Genbank发表的核酸序列分别设计合成流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病病毒的特异引物应用PCR（或RT-PCR）分别扩增各病毒的特异片断并克隆到pMD18-TSimpleVector构建重组质粒用于各病毒探针的制备。将各探针按一定的阵列点加到硝酸纤维素膜上制备成低密度基因芯片。在多重PCR过程中用生物素标记的dUTP(Bio-11-dUTP)对待检样品进行标记扩增产物与基因芯片杂交最后用扫描仪进行读片和分析。对临床疑似病例检测结果表明该方法可以同时检测待检样品中4种病毒的存在情况与PCR方法相比显示了较高的灵敏度。该方法的建立为批量样品的检测和猪呼吸道疾病综合征流行病学调查提供了一种快速、灵敏和高通量的手段。关键词：呼吸道疾病综合征；基因芯片；多重PCR；核酸杂交LowDensityDNAarrayforDiagnosingPorcineRespiratoryDiseaseComplexGAOShuxia24WUShiyou1YINYanbo1ZHUANGWenzhong3NIUZhongxiang2(1ShandongOlandInstituteofBioengineeringQingdao261001;2CollegeofAnimalScienceandTechnologyShandongAgricultureUniversityTai’an2710183.ShandongAgricultureofficeJinan250013;4ShandongAcademyofAgricultureScience250100)Abstract：BasedonthepublishednucleotidesequencesofInfluenzaAvirusPorcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusPorcinecirocovirus-2andPorcinepseudorabiesvirus4pairsofprimersweredesigned.AndconservedDNA(orcDNA)fragmentsofthe4virusesobtainedbyusingPCR(orRT-PCR)wereligatedwithpMD18-TSimpleVectortoconstructrecombinantplasmidforDNAprobepreparation.TherecoveredDNAprobeswerespottedonlocatedsitesonnitrocellulosefiltertopreparelowdensityDNAarray.DuringtheprocessofmultiplexPCRsampleswerelabeledbyBiotin-11-dUTP.ThenthelabeledPCRproductswerehybridizedwithDNAarraysandthehybridizationsignalswerescannedandanalyzedbyscanningdeviceandsoftware.TheresultsshowedthatthisDNAarraycouldidentifyanddistinguishthe4virusesinsamplessynchronouslyandwasmoresensitivethanPCRmethod.Thismethodcanbeuseforlabdiagnosisepidemiologyinvestigationandquarantineofanimalandanimalproductsinalarge-scale.Keywords：Porcinerespiratoryd