放线菌新种分类鉴定.pptx

放线菌新种分离鉴定1、实验目的2、实验方法2.1分离方法2011/12/28AA.电镜B.培养特征C.生理生化实验a.pH、盐浓度和温度耐受性b.明胶液化c.淀粉水解d.脲酶的产生将待测菌种接在硝酸盐液体培养基中，置室温下培养，1、3、5d取样测定。每株菌作复本，另两管作对照。培养液中加入格里氏试剂A、B液各一滴，如呈现粉红色、玫瑰红色，表明硝酸盐还原阳性，如无红色出现，则加1，2滴二苯胺试剂，如呈蓝色，表示培养液中仍有硝酸盐存在，硝酸盐还原属阴性，若不呈蓝色，表示硝酸盐和亚硝酸盐都已还原成其他物质，仍按阳性结果处理。g.H2S的产生某些细菌能分解含硫化合物如胱氨酸、甲硫氨酸而产生硫化氢气体，若于培养基中加入柠檬酸铁铵或醋酸铵，则与硫化氢作用生成硫化亚铁或硫化铅（黑色）沉淀。h.黑色素的产生将供试菌株接种在酪氨酸培养基斜面管上，培养7d和14d观察结果，培养基被染成褐色或者黑色即说明该菌产生黑色素。i.碳源利用和氮源利用（本实验利用BIOLOG板）AA.细胞壁化学组分胞壁类型糖类型全细胞TLC分析实验流程：磷酸类脂位于放线菌细胞膜上，属于极性脂。不同属菌的磷酸类脂组份是不同的，它是鉴别属的重要特征之一，是化学分类项目中不可缺少的分类指征。磷酸类脂的种类繁多，但用于分类的指征并不多。用于分类指征的磷酸类脂只有五种：磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine,PE）磷脂酰甲基乙醇胺（phosphatidylmethylethanolamine,PME）磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine,PC）磷脂酰甘油（phosphatidylglycerol,PG）含葡萄糖胺的未知结构磷酸类脂（phospholipidsofunknownstructurecontainingglucosamine,GluNu）称取1g湿菌体于带螺口的40ml离心管中。加入15ml甲醇。100℃水浴10min，自然冷却。加入10ml氯仿和6ml0.5%NaCl。用力摇匀10min，静止可看到分层。8000rpm，离心10min。到入分液漏斗静止分层，取下层。30-40℃旋转蒸干。分两次各加入200μl氯仿/甲醇（2:1）冲洗器壁。液体移入EP管（约100-200μl）,8000rpm，离心10min，去沉淀。4℃保存备用。点样（距离底边2*2cm，点样10μl，溶剂前沿1cm）C.甲基萘醌测定2011/12/28菌体的收集制备待测菌株用液体培养基培养，离心收集菌体，用蒸馏水洗涤两次，菌体于-80℃冷冻3d，冷冻干燥机抽干菌体，冻干菌体4℃干燥器保存备用。醌的提取及纯化D.脂肪酸测定2.2.3基因型分类A.G+C%含量分析HPLC实验：B.DNA-DNA分子杂交2011/12/28C.16srRNA基因序列分析及进化树的构建