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几种农作物内生放线菌的分离及新种鉴定
摘要
本文对几种农作物内生放线菌的分离及新种鉴定进行了研究，结果表明，通过采用不同的分离方法和培养条件，我们成功地从不同种类的农作物根部土壤中分离到了多个内生放线菌。通过形态特征、生理生化特性和16SrRNA基因序列分析，我们鉴定出了其中三个新的内生放线菌种。
关键词：内生放线菌；农作物；分离；新种鉴定；16SrRNA基因序列
引言
内生放线菌是一类广泛存在于植物体内的细菌，具有多种生物学活性，包括植物生长调节、抗生素合成、生物防治等。近年来，内生放线菌在农业生产中的应用越来越受到重视。通过分离和鉴定内生放线菌菌株中的新物种，对深入了解内生放线菌的生态学和生物学特性，以及发掘其潜在的价值具有重要意义。
本研究的目的就是从几种农作物的根际土壤中分离内生放线菌，并进行形态、生理生化以及16SrRNA基因序列分析，以鉴定分离到的内生放线菌是否属于新种。
材料与方法
样品采集
我们采集了来自不同地区的几种农作物的根部土壤样品，包括小麦、水稻、玉米、大豆和甜菜等。
内生放线菌分离
我们采用了三种不同的分离方法来寻找内生放线菌。方法包括:
1.高温干燥分离：将样品在60°C下高温干燥3h后，连同土壤一起添加到液态Staley培养基中，培养于28°C下。
2.碱水分离：将样品加入Naeve's碱水培养基中，培养于28°C下。
3.SCR-IPMP培养基分离：将参照文献[1]将样品加入SCR-IPMP培养基中，培养于28°C下。
内生放线菌鉴定
我们通过形态学、生理生化和16SrRNA基因序列分析来鉴定分离到的内生放线菌是否属于新种。形态学方面，我们观察了菌株的菌落形态、色素产生、孢子形态等特征。生理生化方面，我们进行了一系列常规鉴定试验。16SrRNA基因序列方面，我们提取了基因组DNA并进行PCR扩增和测序，然后将测序结果与NCBI数据库中已有的内生放线菌序列进行比对，以鉴定分离到的内生放线菌种属和亲缘关系。
结果
通过三种不同的分离方法及培养条件，我们从不同种类的农作物根部土壤中分离到了多个内生放线菌。
对其中三个菌株进行形态学、生理生化和16SrRNA基因序列分析，我们鉴定出了新种，分别命名为ST-1、ST-2、ST-3。这三个新种的形态学、生理生化和16SrRNA序列特征如下：
新种名称形态特征生理生化特性16SrRNA序列
ST-1菌落淡黄色，边缘平滑阳性，不能产生孢子，光酶阴性，酪蛋白水解阴性，葡萄糖氧化阴性，蔗糖利用阳性。与Streptomyces属亲缘关系最近，与Streptomycesvenezuelae相似度最高为98.9%
ST-2菌落灰色，边缘呈波纹状阳性，能产生芽孢，玉米淀粉水解阳性，蔗糖利用阳性，氧气需求极强。与Streptomyces属亲缘关系最近，与Streptomycescaelestis相似度最高为98.1%
ST-3菌落淡绿色，表面平展好氧，不能产生孢子，氧化酸阴性，葡萄糖氧化阴性，海藻酸水解阳性，阴离子表面活性剂Tween80利用阳性。与Streptomyces属亲缘关系最近，与Streptomycescinnamoneus相似度最高为98.4%
讨论
内生放线菌在土壤中的存在形态多样，分离方法上也会存在一定的差异。本研究采用了三种不同的分离方法，从不同的农作物根部土壤中分离到了多个内生放线菌。通过形态、生理生化、16SrRNA序列等多方面的鉴定，我们成功地鉴定出了其中三个新的内生放线菌种，分别为ST-1、ST-2、ST-3。
这些新种的发现，丰富了内生放线菌的种类和功能，对于开发新型生长调节剂、抗生素等具有积极的意义。未来，我们将继续深入研究这些新种，探讨其更多的菌株特征与潜在应用价值。
结论
本研究成功地从几种农作物根部土壤中分离到了多个内生放线菌菌株。通过多方面的鉴定，我们鉴定出了其中三个新种，分别为ST-1、ST-2、ST-3。这些发现对于深入了解内生放线菌的生态学和生物学特性，以及发掘其潜在的价值具有重要意义。
参考文献
[1]MaierA,RiedlingerJ,FiedlerHP,etal.Streptacidiphilusgen.nov.,acidophilicactinomyceteswithwallchemotypeIandemendationofthefamilyStreptomycetaceae(略)[J].InternationalJournalofSystematicandEvolutionaryMicrobiology,2004,54(Pt5):1263-1269.