仪器分析-高效液相色谱法.pptx

第三章高效液相色谱分析HighPerformanceLiquidChromatography(HPLC)3-1高效液相色谱法的特点它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点．为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较：1．高效液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较2．高效液相色谱法与气相色谱法(2)高效GC1000塔板/m(填充柱）HPLC3W塔板/m(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作．总之，高效液相色谱法是吸取了气相色谱与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展．高效液相色谱与气相色谱的比较液相色谱仪器highperformanceliquidchromatograph3.高效液相色谱法的应用4.高效液相色谱法的特点人参、西洋参与三七的鉴别3-2影响色谱峰扩展及色谱分离的因素高效液相色谱中的速率方程涡流扩散项纵向扩散流动相传质滞留区传质固定相内传质2.对速率方程的讨论3.柱外效应3-3高效液相色谱的类型及其分离原理流动相和固定相都是液体液—液分配色谱正相色谱——固定液极性>流动相极性（NLLC）极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱适于分离极性组分反相色谱——固定液极性<流动相极性（RLLC）极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱适于分离非极性组分液—液分配色谱利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面分离原理：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异液—固吸附色谱液—固吸附色谱3、离子交换色谱ion-exchangechromatography离子色谱法是由离子交换色谱法派生出来的一种分离方法。由于离子交换色谱法在无机离子的分析和应用受到限制。例如，对于那些不能采用紫外检测器的被测离子，如采用电导检测器，由于被测离子的电导信号被强电解质流动相的高背景电导信号掩没而无法检测。为了解决这一问题，1975年Small等人提出一种能同时测定多种无机和有机离子的新技术。离子色谱5、空间排阻色谱（凝胶色谱）size-exclusionchromatography空间排阻色谱法液相色谱分离类型的选择（2）根据溶解度选择如：样品可溶于水并属于能离解物质，以采用离子交换色谱为佳；如：样品可溶于烃类（如苯或异辛烷），则可采用液--固吸附色谱（3）根据分子结构选择例如，酸、碱化合物宜用离子交换色谱；脂肪族或芳香族宜用液--液分配色谱或液--固吸附色谱；异构体用液--固吸附色谱；同系物用液--液分配色谱．等等。分离类型选择总结，P933-4液相色谱法固定相（2）全多孔型由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见；现采用5~10μm的小颗粒，比表面积和柱容量都很大。1、液液色谱法、键合相色谱法及离子对色谱法固定相1）全多孔型单体（porousmicrobeadssupport）2）表层多孔型担体（pellicularmicrobeadssupport）化学键合固定相（1960后）类型化学键合固定相特点2．液固吸附色谱法固定相在气相色谱中，载气是惰性的，常用的只有三四种，他们的性质差异也不大，所以要提高柱子的选择性，只要选择合适的固定相即可。但在液相色谱中，当固定相选定后，流动相的种类、配比能显著的影响分离效果，因此，流动相的选择也非常重要。液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相的选择原则常用溶剂的极性顺序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六环>四氢呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>异丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)高效液相色谱仪高效液相色谱仪：贮液器、高压泵、梯度洗提装置、进样器、色谱柱、检测器、恒温器和色谱工作站等。1.高压泵2.梯度洗提应用举例3.进样装置旋转式六通阀高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多（约5～30cm），所以柱外展宽（又称柱外效应）较突出。进样系统是引起往前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严。色谱柱是液相色谱仪的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分．柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属．玻璃管耐压有限，故金属管用得较多，目前标准色谱柱长15～30cm，内径为4.6mm或3.9mm，直型不锈钢柱液相色谱柱发展趋势5．检测器5．检测系统理想的检测器特性(1)紫外－可见检测器紫外检测器响应特性示差折光检测器示差折光检测器（differentialrefractiveindexdetector）响应特性荧光检测器（fluorescencedete