仪器分析教程高效液相色谱法.pptx

仪器分析教程高效液相色谱法1．高效液相色谱法与经典液相色谱法2．高效液相色谱法与气相色谱法(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。
总之，高效液相色谱法是吸取了气相色谱与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展。目前高效液相色谱法已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。

高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺点。20-2高效液相色谱仪2．进样系统3分离系统——色谱柱4．检测系统20-3高效液相色谱的固定相和流动相1.表面多孔型固定相2．全多孔型固定相（二）流动相（3）高纯度。由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。痕量杂质的存在，将使截止波长值增加50～IOOnm。
（4）化学稳定性好。不能选与样品发生反应或聚合的溶剂。
(5)低粘度。若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙晴等。但粘度过于低的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离.20-4高效液相色谱法的主要类型及选择3．流动相
在液液色谱中为了避免固定液的流失。对流动相的一个基本要求是流动相尽可能不与固定相互溶，而且流动相与固定相的极性差别越显著越好。根据所使用的流动相和固定相的极性程度，将其分为正相分配色谱和反相分配色谱。如果采用流动相的极性小于固定相的极性，称为正相分配色谱，它适用于极性化合物的分离。其流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出。如果采用流动相的极性大于固定相的极性，称为反相分配色谱。它适用于非极性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好相反。（二）化学键合相色谱法（CBPC）2．键合固定相的制备
（l）硅酸酯（≡Si一OR）键合固定相,它是最先用于液相色谱的健合固定相。用醇与硅醇基发生酯化反应：
≡Si－0H＋ROH→≡Si－OR＋H20
由于这类键合固定相的有机表面是一些单体，具有良好的传质特性,但这些酯化过的硅胶填料易水解且受热不稳定，因此仅适用于不含水或醇的流动相。
（2）≡Si－C或Si一N共价键合固定相
制备反应如下共价键健合固定相不易水解，并且热稳定较硅酸酯好。缺点是格氏反应不方便；当使用水溶液时，必须限制PH在4～8范围内.（3）硅烷化（≡Si—O－Si－C）键合固定相
制备反应如下：3．反相健合相色谱法4.正相键合相色谱法5.离子性键合相色谱法（三）液一固吸附色谱法(LSAC)2．固定相3流动相(四）离子交换色谱法（IEC）1．离子交换原理
离子交换色谱法是利用不同待测离子对固定相亲和力的差别来实现分离的。其固定相采用离子交换树脂，树脂上分布有固定的带电荷基团和可游离的平衡离子。当待分析物质电离后产生的离子可与树脂上可游离的平衡离子进行可逆交换，其交换反应通式如下：
阳离子交换：达平衡时，以浓度表示的平衡常数（离子交换反应的选择系数）：3．流动相（五）离子色谱法（IC）R+－OH＋H+Cl--→R+－Cl十H2O
R+一OH-＋M+Cl--→M+OH－＋R+－Cl-
由反应可见：经抑制柱后，一方面将大量酸转变为电导很小的水，消除了流动相本底电导的影响。同时，又将样品阳离子M+转变成相应的碱，由于OH-离子的淌度为Cl-离子的2．6倍，提高了所测阳离子电导的检测灵敏度。对于阴离子样品也有相似的作用机理。
在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱亦称为抑制型离子色谱或称双柱离子色谱。由于抑制柱要定期再生，而且谱带在通过抑制柱后会加宽，降低了分离度。后来，Frits等人提出采用抑制柱的离子色谱体系，而采用了电导率极低的溶液，例如1×10-4～5×10-4mol·dm-3苯甲酸盐或邻苯二甲酸盐的稀溶液作流动相，称为非抑制型离子色谱或单柱离子色谱。（六）离子对色谱法（IPC）由于离子对化合物A-B+具有疏水性，因而被非极性固定相（有机相）提取。组分离子的性质不同，它与反离子形成离子对的能力大小不同以及形成的离子对流水性质不同，导致各组分离子在固定相中滞留时间不同，因而出峰先后不同。这就是离子对色谱法分离的基本原理。根据上两式，有（七）尺寸排阻色谱法（SEC）2．固定相
排阻色谱固定相种类很多，一般可分为软性、半刚性和刚性凝胶三类。表20-6列出了常用的一些固定相。
所谓凝胶，指含有大量液体（一般是水）的柔软而富于弹性的物质，它是一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体。
（1）软性凝胶如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶都具有较小的交联结构，其微孔能吸入大量的溶剂，并能溶胀到它们干体的许多倍。它们适用以水溶性溶剂作流动相，一般用于小分子质量物质的分析，不适宜用在高效液