微生物的分离-培养和菌种保藏.pptx

微生物的分离、培养和菌种保藏微生物的分离、培养和菌种保藏目的要求实验材料实验程序实验程序1（微生物的分离）微生物的分离—稀释平板法图－1土壤稀释液的制备和稀释液的取样微生物的分离—平板涂抹法微生物的分离—平板划线法实验程序2（微生物的接种方法—斜面接种法）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管的底部，轻轻向上划线（直线或曲线）。接好种的斜面试管口再次过火焰，棉塞底部过火焰后立即塞入试管内。将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼，使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，使菌体爆溅，造成污染。放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2～3cm处贴上标签。28～37℃恒温培养。无菌操作简介微生物的接种方法—液体接种和穿刺接种实验程序3（微生物培养中的氧气条件）微生物培养中的氧气条件－厌氧培养微生物培养中的氧气条件－厌氧培养微生物培养中的氧气条件－厌氧培养实验程序4（微生物的菌种保藏方法）微生物的菌种保藏方法砂土管保藏法：(可用于保藏产孢子的放线菌、霉菌和产芽孢的细菌）。1.砂土管的制备：取河沙若干，用40目过筛，出去大颗粒，加10%HCl后煮沸30min，除去有机质（也可用10%HCl浸泡2—4h)。最后倒去酸水，用自来水冲洗至中性，烘干备用。另取0.3m以下非耕作层的瘦黄土若干，晒干磨细，过120目筛。2.按土：砂＝1：4的比例均匀混合，装入指形管中，以1cm高为宜，塞上棉塞，160～170℃干热灭菌2h。3.在新鲜菌种斜面上加入3mL左右的无菌水，用无菌接种环制成菌悬液，用无菌吸管吸取0.2～0.3ml的菌悬液放入每个砂土管中，用接种环拌匀，并贴上标签，注明菌名。4.菌液加好后，立即进行抽真空干燥，要求在24h内抽干，尤其是夏天要求较短时间内抽干。摇散砂土，放干燥器内冰箱保藏。冷冻真空干燥保藏法：此法一般常用于细菌或病毒一类的菌种保藏，常用脱脂牛奶或血清作为菌种的保护剂。1.脱脂牛奶的制法：将牛奶加热到80℃左右，然后冷却，除去表面的一层脂肪。这样反复2—3次后用脱脂棉花过滤，并在3000r/min的离心15min，再除去表面脂肪。将脱脂牛奶装入三角瓶中，用0.5kg/cm2高压灭菌30min，连续2次，并作无菌试验。2.用无菌的脱脂牛奶将新鲜斜面菌种制成牛奶菌种悬液，无菌操作装入安瓿管中（装量不超过其体积的1/3)。3.预冻：将分装好的安瓿管在－25～－40℃之间的干冰酒精中进行预冻，1h后即可抽气进行真空干燥。4.真空干燥：预冻后放入真空干燥箱中，开启真空泵进行干燥。5.封管前将安瓿管装入多歧管上，开启真空泵，当真空度达到0.01mm汞柱后用火焰熔封。6.做好的安瓿管放入冰箱中保藏。实验程序5（四大类微生物菌落形态的比较和识别）四大类微生物菌落形态的比较和识别思考题试验报告实验实验八实验目的和内容实验仪器,材料和用具实验仪器,材料和用具实验仪器,材料和用具实验步骤3.甲基红试验(MR试验)将大肠杆菌和枯草杆菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，37℃培养48h，加甲基红指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。4.伏-普二氏试验(V.P试验)将被检菌接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，37℃培养48h。5..柠檬酸盐利用试验取少量被检菌接种到柠檬酸盐培养基上，37℃培养24h后，观察结果。6.靛基质(吲哚)试验将被检菌接种到胰蛋白胨水培养基中，37℃培养24h～48h后。7.硫化氢试验：将大肠杆菌和枯草杆菌以接种硫化氢培养基中，37℃培养24h，观察结果。将滤纸条插入试管，滤纸条的最下端离液面上方1cm。最上端露在试管口外。8.淀粉水解试验将配制好的淀粉培养基冷却到50℃左右，以无菌操作制成平板。用接种环取少许枯草杆菌划线接种在平板的一边，再取少许大肠杆菌划线接种在平板的另一边。置37℃温箱培养24h。