仪器分析四版高效液相色谱.pptx

12345四、高效液相色谱（一）高效液相色谱（HPLC）含义：高效能固体细微粒为固定相高压溶剂为流动相高灵敏度检测器7（二）高效液相色谱与其它色谱方法的比较2.HPLC与GC的比较按固定相的聚集状态分类：液-固色谱法液-液色谱法按分离机制分类：分配色谱法吸附色谱法离子交换色谱法空间排阻色谱法其它分离机制色谱法：亲合色谱法AC胶束色谱法MC手性色谱法CC毛细管电色谱法CEC第二节高效液相色谱仪高压输液系统：储液器、吸滤器、高压输液泵、脱气装置及梯度洗脱装置进样系统：进样器，进样阀分离系统：色谱柱，恒温箱检测系统：检测器记录系统：记录装置、色谱工作站1、贮液器和吸滤器：2、高压输液泵活塞型往复泵——液相色谱仪中使用最广泛的恒流泵离线超声波振荡脱气在线惰性气体鼓泡吹扫脱气在线真空脱气装置4、梯度洗脱装置：二、进样系统三、色谱柱四、检测系统石英窗四、检测系统2、荧光检测器3、蒸发光散射检测器光源接参比电极和对电极检测器五、数据处理和计算机控制系统1、要求：粒径小、颗粒分布均匀传质快、渗透压小机械强度高、能耐高压化学稳定性好一、固定相（2）按孔隙深度分表面多孔型：实心玻璃珠为基体，基体表面覆盖一层多孔活性材料适于常规分离分析全多孔型：全部由硅胶或氧化铝微粒聚集而成适于复杂混合物的分离。3.常用固定相液固色谱固定相常用粒径3~10μm，理论塔板数过5万/米无定形全多孔硅胶：YWG球形全多孔硅胶：YQG高分子多孔微球：YSG3.常用固定相化学键合固定相以硅胶为载体，借化学反应方法将有机分子以共价键连接在硅醇基上Si-O-R：热不稳定、易水解，适于不含水或醇的流动相Si-R(或Si-N)：不水解，热稳定性较好。但格式反应不方便。使用水溶液作流动相时，其pH应在4-8之间。Si-O-Si-R：不水解，热稳定性好，pH2-8范围内对水稳定3.常用固定相化学键合固定相非极性键合相：十八烷基键合相（ODS，C18）中等极性键合相：醚基键合相极性键合相：氨基、氰基键合相3.常用固定相其它固定相离子交换固定相：离子交换树脂、键合型离子交换树脂空间排阻色谱固定相：凝胶手性固定相：手性官能团键合或天然手性物质固着在载体上如环糊精亲合色谱固定相：生物专一性配基+载体二、流动相——淋洗液，洗脱剂2、流动相组成正相色谱：极性固定相——非极性流动相（加极性调节剂如氯仿）——极性柱（正相柱）41正相色谱4344451、选择因子472、分配系数K495051六、色谱分离速率方程—范第姆特方程（VanDeemterequation）第四节HPLC分离条件的选择（1）固定相：①粒度小，均匀，以减小涡流扩散和流动相传质阻力；②改进结构，采用大孔径和浅孔道的表面多孔型载体或全多孔微粒型载体，减少滞留流动相传质阻力。（2）流动相：低粘度的流动相——增大组分在溶剂中的扩散系数Dm——减少传质阻力（3）流速：最佳流速在流速很小处，减小流速有利提高柱效常采用比最佳流速高数倍的流速——加快分析速度（4）柱温：提高柱温——降低流动相粘度——减少传质阻力——分辨率降低，柱寿命短，易产生气泡，一般在室温下进行第五节HPLC的建立与应用一、建立HPLC分析方法的一般步骤一、建立HPLC分析方法的一般步骤一、建立HPLC分析方法的一般步骤二、HPLC定性定量分析方法二、HPLC定性定量分析方法1、在食品分析中的应用食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、矿物质等；食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂、抗氧化剂等；食品污染物分析：霉菌毒素、微量元素、多环芳烃等。2、在环境分析中的应用多环芳烃、农药（如氨基甲酸脂类）残留等。3、在生命科学中的应用分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具低分子量物质：氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等分离和测定高分子量物质：多肽、核糖核酸、蛋白质和酶的纯化、分离和测定4、在医学检验中的应用体液中代谢物测定；药代动力学研究；临床药物监测：合成药物：抗生素、抗忧郁药、黄胺类药等天然药物：生物碱（吲哚碱、强心甙）等5、在无机分析中的应用阳、阴离子的分析等。一、含义电泳：带电粒子在电场作用下迁移电渗：溶剂在电场作用下的单向流动电渗流速度是电泳流速度的5-7倍，混合物中所有的组份随电渗流朝一个方向迁移。流出顺序：①正离子②中性粒子③负离子毛细管区带电泳（CZE）毛细管凝胶电泳（CGE）胶束电动毛细管色谱（MECC）毛细管离子分析1、毛细管区带电泳CZE2、毛细管凝胶电泳CGE（1）缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。（5）色谱与电泳分离模式的结合。三、高效毛细管电泳仪器1、高压电源：产生0~30kV稳定连续可调电压四、应用及前景特点：A、分离效率高：104理论