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基因工程操作的程序识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。什么叫黏性末端？什么叫平末端？限制酶所识别的序列有什么特点？限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。图1-1限制酶识别序列的中心轴线二、“分子缝合针”——DNA连接酶T右图示某DNA片段，有关该图的叙述中，不正确的是A．②③④可形成DNA的基本组成单位B．②③④构成的结构在DNA中特定排列顺序可代表遗传信息C．某限制性内切酶可选择⑦作为切点D．DNA连接酶可连接①处断裂的化学键DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？答：不是一回事。基因工程中所用的连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·coli连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4连接酶。这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口（nick），而不能连接单链DNA。DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键（在相邻核苷酸的3位碳原子上的羟基与5位碳原子上所连磷酸基团的羟基之间形成），那么，二者的差别主要表现在什么地方呢？（1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。（2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。三、“分子运输车”—基因进入受体细胞的载体：§1.2基因工程的基本操作程序①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。真核细胞的基因结构一、目的基因的获取(一)从基因文库中获取目的基因2.基因文库的构建方法②反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。③根据已知的氨基酸序列合成DNA法：上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术PCR三步曲PCR反应参数：⑥过程：(二)利用PCR技术扩增目的基因中学专用PCR仪是我公司根据生物新课标要求，结合中学教学特点研制而成的。上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键（在相邻核苷酸的3位碳原子上的羟基与5位碳原子上所连磷酸基团的羟基之间形成），那么，二者的差别主要表现在什么地方呢？内含子：不能编码蛋白质的序列操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高具一个多个限制酶切位点质粒，使其出现一个切(一)从基因文库中获取目的基因补：真核细胞的基因结构因此DNA连接酶不需要模板。彩色大屏幕，中文菜单，便于学习加深理解DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？二、“分子缝合针”——DNA连接酶T4DNA连接酶:A、限制酶只在获得目的基因时才用编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？D、人工合成目的基因不用限制性内切酶1.用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。2.用_____________切断目的基因，使其产生_________________。操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高用_____________切断目DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键（在相邻核苷酸的3位碳原子上的羟基与5位碳原子上所连磷酸基团的羟基之间形成），那么，二者的差别主要表现在什么地方呢？C、具有标记基因2、获取目的基因的常用方法有哪些?（2）原理及适用范围(双子叶植物和裸子植物)(三)将目的基因导入受体细胞二、“分子缝合针”——DNA连接酶①概念：PCR全称为_______________，是一项限制酶所识别的序列有什么特点？2）不属于质粒被选为基因运载体的理由是D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料5.基因表达载体的组成：(三)将目的基因导入受体细胞1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法（1）农杆菌介绍（2）原理及适用范围(双子叶植物和裸子植物)(三)将目的基因导入受体细胞2、将目的基因导入动物细胞（1）方法：显微注射法（2）程序：(四)目的基因的检测与鉴定DNA分子杂交示意图小结1）以下说法正确的是（）A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D、基因控制的性状都能在