基因工程的基本操作程序-学案【实用文档】doc.doc

基因工程的基本操作程序学案【实用文档】doc文档可直接使用可编辑，欢迎下载课题１．2基因工程的基本操作程序学习目标:简述基因工程的原理和技术。理解基因操作的工具和基本程序及应用。学习重点和难点:重点:提取目的基因的方法。难点:目的基因导入受体细胞的途径.自学测评：基因工程的基本操作程序主要包括4个步骤：①目的基因的;②的构建；③将目的基因;④目的基因的.一、目的基因的获取：１、目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的.２。获取目的基因的方法(1)从基因文库中获取目的基因①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多,导人受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因组文库:含有一种生物的基因②种类cDNA文库:含有一种生物的基因③目的基因的获取根据基因的有关信息:基因的序列、基因在上的位置、基因的产物mRNＡ、基因的产物蛋白质等特性获取目的基因。（2）利用PＣR技术扩增目的基因.①ＰCR:是一项在生物体外特定DNA片段的核酸合成技术.②过程：目的基因DＮA受热形成，与结合，然后在ﻩ＿＿＿_的作用下进行延伸形成DＮA。③方式：指数扩增=(n为扩增循环的次数）(3）化学方法人工合成：基因较,核苷酸序列。二、基因表达载体的构建1、表达载体的组成:目的基因+++标记基因+。2、启动子:位于基因的，它是结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。3、终止子:位于基因的，终止。４、标记基因:受体细胞是否含有目的基因。5、表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且给下一代；使目的基因ﻩ_＿__和发挥作用。6、不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法，基因表达载体的构建上也会有所差别。三、将目的基因导入受体细胞(一）转化:目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和的过程。(二)方法１、将目的基因导入植物细胞(1）农杆菌转化法①农杆菌特点：易感染植物和裸子植物，对______＿____植物没有感染力；Ti质粒的可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。②转化：目的基因插人农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达.（２）基因枪法：是植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。（３)花粉管通道法２.将目的基因导入动物细胞(1）方法：。（２)操作程序：目的基因表达载体→取→显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到____性动物的_＿______＿内发育→新性状动物。3。将目的基因导人微生物细胞(1）原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。（２）转化：处理细胞→细胞→表达载体与感受态细胞混合→_＿＿细胞吸收ＤNA分子。四、目的基因的检测与鉴定类型步骤检测内容方法结果显示水平检测第一步目的基因是否进入受体细胞是否成功显示出杂交带第二步目的基因是否转录出mRＮA是否成功显示出杂交带第三步目的基因是否翻译出蛋白质是否成功显示出杂交带水平鉴定合作探究、精讲点拨:探究一目的基因的获取１、基因文库文库文库2.原核细胞和真核细胞的基因结构（1)原核细胞的基因结构（2）真核细胞的基因结构3.PCR技术原理:前提：一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成条件:、、、、过程：a．变性（℃）：目的基因DNＡ受热变性后接连为单链ｂ．退火(℃）：与单链相应互补序列结合c．延伸（℃）：在的作用下进行延伸Taq酶的特点是.PCR扩增技术与DNA复制的比较PCR技术DNＡ复制相同点原理DＮA复制(碱基互补配对）不同点解旋方式DNA在条件下变性解旋催化场所复制（ＰCR扩增仪）主要在内酶酶细胞内含有的能量结果在短时间内形成大量的形成整个探究二基因表达载体的构建用一定的_＿_＿＿___＿切割质粒，使其出现一个切口,露出__＿______＿＿_.用__＿__＿_______切断目的基因，使其产生_＿______＿_____＿＿。将切下的目的基因片段插入质粒的__＿_＿_处,再加入适量__＿_＿_＿_＿__，形成了一个重组DNA分子（重组质粒)探究三目的基因导入受体细胞－--转化细胞类型常用方法转化过程植物细胞将目的基因插入Ti质粒的T—DNＡ上→转入农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNＡ上→表达动物细胞将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→早期胚胎培养→胚胎移植→发育成为具有新性状的动物微生物用Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子探究四目的基因的检测与鉴定——检查是否成功问题１:受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？问题2．试分析真核生物的基因导入细菌细胞后，不能正常发挥功效的可能原因有哪些？拓展提高、达标测评：1.下列正确表示基因操作“四部曲”的是（）A.提取目的基因→目的基因导入受体细胞→