液相色谱实验操作ppt课件.ppt

液相色谱教程(三)液相色谱实验操作启动液相色谱仪器的流程启动液相色谱仪器的流程液相色谱对流动相的要求液相色谱对流动相的要求流动相的脱气流动相脱气的方法流动相的保存色谱泵的排气操作Waters515泵的前面板Waters600泵的前面板Waters2695分离单元2695排气操作示意图色谱泵的运行色谱泵的维护保养液相色谱系统的清洗与钝化色谱泵及系统的清洗色谱泵及系统的钝化实验样品的制备复杂样品的预处理样品预处理的重要性样品预处理常用的方法去除微粒的方法超滤选择性沉淀样品衍生AccQ-Tag衍生法浓缩样品OasisHLB固相提取小柱SPE处理的效果进样器的使用手动进样器的使用自动进样器的使用自动进样器的洗针液检测器的启动操作Waters2487检测器2487的显示屏幕2487的面板及操作Waters2996PDA检测器由软件设定检测器参数Waters2414示差折光检测器2414的显示屏幕2414的面板及操作2414检测器的日常操作使用示差检测器的注意事项Waters2475荧光检测器2475检测器的特点2475的主显示屏2475的面板及操作2475荧光检测器的扫描功能荧光检测器使用注意事项流动相脱气与否的信号比较样品浓度对激发和发射波长的影响检测器的使用和保养xx液相色谱柱基础知识(3)液相色谱柱与分离机理的关系对HPLC色谱柱的要求(1)硅胶基质C18填料都相同吗？色谱柱品牌名称Minutes品牌不同的影响:(相同配体)分停流速后(孔去湿:~3%)带有极性基团的反相色谱填料水表面层机理SymmetryShield™RP18TfUSP=1.1注:使用相同的流动相色谱柱选择性比较表对HPLC色谱柱的要求(2)USP拖尾因子（TailingFactor）:Tf＝不对称因子(AssymmetryFactor):As＝对称峰形的益处由于拖尾引起的灵敏度差异峰形对分离度的影响不同填料的峰形比较具有良好峰形的Symmetry柱对HPLC色谱柱的要求(3)色谱柱重现性的重要性同一批次合成的填料—色谱柱之间的重现性柱床填充质量控制塔板数色谱峰对称性反压无选择性差异不同批次合成的填料—色谱柱批次间重现性颗粒的物理性质表面之化学性质Symmetry—优异的重现性不同批次间重现性紫杉醇中的不纯物分析:三批色谱柱所得色谱重叠图Symmetry™色谱柱优点对HPLC色谱柱的要求(4)pH对填料稳定性的影响XTerra色谱填料灵敏度与选择性的改变简化方法开发过程Xterra:高温寿命试验Xterra色谱柱的优点最新研制的Atlantis反相柱新型AtlantisTM填料的性质新型AtlantisTM填料的特点同时分离极性与非极性化合物儿茶酚胺及其代谢产物水溶性维生素(Vitamins)反相色谱柱的选择小结:(1)需要使用宽pH值或高温条件－如生物碱分离XTerra杂化颗粒技术：pH1-12优点：pH范围宽，高温条件下填料稳定性好，色谱峰形好，寿命长采用质谱检测器:窄内径/小颗粒/短柱XterraMSC18AtlantisSymmetryC18需要提高极性物质的保留常规pH：AtlantisdC18极端pH：Xterra：如碱性化合物需要分析分子量较大的多肽或蛋白Symmetry300C18C4液相色谱教程(七)液相色谱常见问题分析色谱图常见问题色谱图常见问题分析(一)色谱图常见问题分析(一)色谱图常见问题分析(一)色谱图常见问题分析(一)色谱图常见问题分析(一)色谱图常见问题分析(一)拖尾是由什么引起的?缓冲液的pH与拖尾色谱图常见问题分析(二)色谱图常见问题分析(二)色谱图常见问题分析(二)色谱图常见问题分析(三)色谱图常见问题分析(三)色谱图常见问题分析(三)HPLC实验中常见问题HPLC常见问题分析系统压力问题压力低或没有压力温度太高;流速太低泵关闭或保险丝断了泵未输送流动相系统内有渗漏处所用溶剂不正确自动进样器在Purge时卡住系统压力问题压力低或没有压力（续）储液瓶中无溶剂低压限设置不当泵未正确排气溶剂入口过滤头堵入口管路中有空气泵失效系统压力问题压力不稳压力传感器问题泵排气不充分泵失效流动相未正确脱气所用溶剂不混溶或易挥发流路基线噪音问题基线不稳定(不重复)检测池中有大的气泡流路中有小气泡流过系统未稳定或未达到化学平衡流动相被污染检测器流动池漏色谱柱污染流路基线噪音问题基线漂移系统不稳或未化学平衡温度波动流动相未正确脱气流动相被污染;流动相中有稳定剂或稳定剂变化检测器流动池漏;系统中有渗漏色谱柱污染;固定相渗漏选用不正确的检测波长(相对于溶剂)有迟流出的组分流路基线噪音问题短程振荡泵压不稳泵入口管松,弯或堵塞溶剂混合不充分检测池中有大气泡泵入口阀脏或失效泵柱塞杆密封垫磨损检测器出口溶液成滴状流入废液瓶流路基线噪音问题长程振荡温度波动溶剂被循环