脐带间充质干细胞对CIA大鼠炎症因子的干预专家讲座.pptx

申明脐带间充质干细胞对CIA大鼠炎症因子干预引言脐带间充质干细胞(umbilicalcordmesenchymalstemcells，Uc-MSC)表示各种胚胎干细胞特有分子标志，含有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低、取材方便、不受道德伦理限制等特征受到临床关注。课题以CIA大鼠为观察对象，探讨RA炎症黏附因子水平改变及Uc-MSC对其干预作用。材料和方法主要试剂试验方法CIA大鼠模型建立：雌性近交系SD大鼠，随机分为正常组(见图1a)、模型组(见图1b)、Uc-MSC组，每组10只。制备0.01mol/L乙酸溶液中溶解鸡源性Ⅱ型胶原(质量浓度为5g/L)，充分溶解后与完全弗氏佐剂(CFA)等体积混合，并充分乳化成Ⅱ型胶原乳剂。予20只大鼠右后足跖皮内注以0.1mL免疫大鼠，第21天时再次以每只0.1mL剂量同部位皮内多点激发注射免疫大鼠，建立Ⅱ型胶原诱导类风湿性关节炎大鼠模型。各组大鼠处理：取Uc-MSC2×109L-1，于造模后第4周Uc-MSC组经大鼠尾静脉注射，模型组注射生理盐水0.5mL。Uc-MSC表型判定：采取流式细胞术对CD14、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105及HLA-DR表面标识进行表型分析，其中CD44、CD73、CD90和CD105阳性，阳性率>95%；CD14、CD34、CD45和HLA-DR阴性，阳性率<2%，确认为Uc-MSC细胞。指标检测：模型组和Uc-MSC组分别于第7天及第35天每组各取5只大鼠麻醉，于腹主静脉取血5mL，分别置肝素抗凝管和血清管中，检测中性粒细胞表面CD11b(FCM法)和血清白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素18、TNF-a、VCAM-1水平(ELISA法)。流式细胞术检测各组大鼠中性粒细胞表面CD11bMFI表示。主要观察指标：①各组大鼠血清白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素18、TNF-a、VCAM-1水平。②各组大鼠中性粒细胞CD11b表示水平。③各组大鼠中性粒细胞表面CD11bMFI表示。统计学分析：采取SPSS10.0及Excel统计学软件完成。组间比较采取方差分析，P<0.05为差异有显著性意义。结果各组大鼠中性粒细胞表面CD11b表示水平模型组CIA大鼠中性粒细胞表面CD11b表示水平显著增高(P<0.05)；Uc-MSC治疗后第35天中性粒细胞表面CD11b表示水平有显著改变(P<0.05)，流式细胞术检测中性粒、细胞表面CD11b，见图2，3。讨论间充质干细胞含有很强趋向炎症和损伤部位特征，在动物试验被证实。间充质干细胞这种在体内微环境作用下主动迁移(即损伤趋化作用)到受损伤部位进行修复称为间充质干细胞“归巢”作用。在体外间充质干细胞介导免疫调整作用研究中发觉，间充质干细胞经过T细胞、B细胞、DC细胞、以及NK细胞等多个步骤完成机体免疫调整作用，调整细胞因子表示。而类风湿关节炎病理基础主要是由T细胞介导包括B细胞、细胞因子、细胞凋亡、蛋白酶等各种原因所致本身免疫性疾病，所以，应用间充质干细胞治疗而干预RA炎症病理基础成为可行。试验发觉经Uc-MSC治疗后CIA大鼠血清白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子a、VCAM-1水平较模型组有不一样程度降低，可见间充质干细胞能够经过其趋化作用抵达炎症部位，进而经过对T细胞及B细胞免疫调整作用进行调控，从而抑制炎症因子表示。且CIA大鼠中性粒细胞表面CD11b平均摄取率显著低于模型组，影响CIA大鼠中性粒细胞表面CD11b表示峰值，使其显著左移，提醒Uc-MSC能使炎症因子及中性粒细胞表面CD11b表示降低，抑制类风关病理性炎症因子释放及内皮细胞异常活化，使炎症因子及中性粒细胞表面CD11b表示降低，有利于缓解症状和改进RA免疫炎性。所以，作者认为上述因子可作为评价Uc-MSC临床治疗效果试验指标。试验初探Uc-MSC治疗RA结果，反应间充质干细胞干预RA致病性炎症因子释放及内皮细胞活化作用，有利于修复RA免疫炎性致畸性关节功效异常。