流式细胞术专题知识讲座.pptx

流式细胞术专题知识讲座利用流式细胞仪对处于快速流动细胞或生物颗粒进行多参数、快速（每秒可达1000-10000个）定量分析和分选（纯度可达99%以上）技术。流式细胞术专题知识讲座流式细胞术专题知识讲座荧光信号主要包含两个别：①自发荧光，即不经荧光染色细胞内部荧光分子经光照射后所发出荧光；②特征荧光，即由细胞经染色结合上荧光染料受光照而发出荧光，其荧光强度较弱，波长也与照射激光不一样。自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧光信号分辨和测量。标本处理流式细胞术常规检测时样品制备直接荧光标识法操作简便，结果准确，易于分析，适合用于同一细胞群多参数同时测定。即使直标抗体试剂成本较高，但降低了间接标识法中较强非特异荧光干扰，所以更适合用于临床标本检测。(二)间接免疫荧光标识法取一定量细胞悬液(约1X106细胞／ml)，先加入特异第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标识第二抗体，生成抗原—抗体—抗抗体复合物，以FCM检测其上标识荧光素被激发后发出荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本检测。但因为二抗普通为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响试验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，因为间标法步骤较多，增加了细胞丢失，不适用测定细胞数较少标本。最小化非特异性结合方法常见荧光染料（488波长激发）培养细胞流式细胞术检测培养细胞表面抗原样品制备方法探讨操作步骤注意事项注意事项血细胞流式检测氯化铵溶血剂(Ammoniumchloridelysingsolution,)用氯化铵溶血剂溶血方法细胞凋亡流式检测PI单染色法（1）PI单染色法（2）调亡细胞TUNEL流式细胞仪分析ISNT流式细胞仪分析Hoechst33342/PI双染色法AnnexinV/PI双染色法细胞因子检测流式检测细胞染色基础过程（以全血为例）流式细胞术分析血小板质控标本流式细胞仪调试和使用在操作和使用中一定要注意以下事项：