NK细胞杀伤活性检测专家讲座.pptx

NK细胞杀伤活性检测--乳酸脱氢酶释放法目标要求【原理】试验原理【试剂】【试剂】试验步骤取培养24~48hr靶细胞(K562),洗涤3次（1000rpm×10min）,最终用完全RPMI-1640培养液调整细胞浓度至1×105/ml,备用。效应细胞制备（分离外周血单个核细胞）密度梯度离心分离淋巴细胞亚群用完全RPMI-1640定容细胞，计数后调整细胞浓度（加入0.2ml完全RPMI-1640，混匀，1x107）计数PBMC计数PBMC举例效-靶细胞作用【操作方法】酶促反应结果计算1、不论采取何种试验方法,靶细胞质量是影响细胞标识率、自然释放率及试验稳定性主要因素。普通要求靶细胞自然释放率<10％。2、分离PBMC时，应用毛细吸管尽可能吸收灰白层，切勿搅动各层。3、吸收细胞培养上清时,应尽可能不吸动沉淀细胞。4、用此法测得NK活性正常值范围在10-40%。试验汇报T淋巴细胞检验E花环形成试验（Erythrocyterosetteformationtest,ERFT）【目标要求】1.掌握T淋巴细胞E花环试验原理、正常值，了解其方法和用途。2.熟悉光镜下E花环形态和计数方法。【试验原理】T细胞表面含有能与绵羊红细胞（SRBC）表面糖肽结合受体，称为E受体（CD2）。已证实E受体是人类T细胞所特有表面标志。当T细胞与SRBC混合后，SRBC便粘附于T细胞表面，展现花环状。经过花环形成检验T细胞方法，称为E花环形成试验。依据花环形成多少，可测知T细胞数目，从而间接了解机体细胞免疫功效状态，判断疾病预后，考评药品疗效等。NK细胞杀伤活性检测专家讲座【试验方法】淋巴细胞与SRBC按一定百分比(1:10)混合37℃5分钟，4℃20分钟取样涂片瑞氏染色、镜检。计数E花环数，算出总花环形成率。正常值为60%~80%。【结果观察】高倍镜检验：淋巴细胞呈蓝色，SRBC呈红色围绕淋巴细胞形成花环，凡表面粘附有3个或3个以上SRBC者为花环形成细胞（即E阳性细胞）。计数200个淋巴细胞，算出花环形成百分率，并推测其T淋巴细胞百分率。正常值为：50～80%。花环形成百分率%=