NK细胞杀伤活性检测ppt课件.ppt

NK细胞杀伤活性检测--乳酸脱氢酶释放法目的要求【原理】实验原理【试剂】【试剂】实验步骤取培养24~48hr的靶细胞(K562),洗涤3次（1000rpm×10min）,最后用完全RPMI-1640培养液调整细胞浓度至1×105/ml,备用。效应细胞的制备
（分离外周血单个核细胞）密度梯度离心分离淋巴细胞亚群用完全RPMI-1640定容细胞，计数后调整细胞浓度
（加入0.2ml完全RPMI-1640，混匀，1x107）计数PBMC计数PBMC举例效-靶细胞作用【操作方法】酶促反应结果计算1、无论采用何种试验方法,靶细胞的质量是影响细
胞标记率、自然释放率及实验稳定性的重要因
素。一般要求靶细胞的自然释放率<10％。

2、分离PBMC时，应用毛细吸管尽可能吸取灰白
层，切勿搅动各层。

3、吸取细胞培养上清时,应尽可能不吸动沉淀的细
胞。

4、用此法测得NK活性的正常值范围在10-40%。实验报告T淋巴细胞检查E花环形成试验
（Erythrocyterosetteformationtest,ERFT）
【目的要求】
1.掌握T淋巴细胞E花环试验的原理、正常值，
了解其方法和用途。
2.熟悉光镜下E花环的形态和计数方法。
【实验原理】
T细胞表面具有能与绵羊红细胞（SRBC）表面糖肽结合的受体，称为E受体（CD2）。已证实E受体是人类T细胞所特有的表面标志。当T细胞与SRBC混合后，SRBC便粘附于T细胞表面，呈现花环状。通过花环形成检查T细胞的方法，称为E花环形成试验。根据花环形成的多少，可测知T细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态，判断疾病的预后，考核药物疗效等。
26【实验方法】

淋巴细胞与SRBC按一定比例(1:10)混合
37℃5分钟，4℃20分钟
取样涂片瑞氏染色、镜检。
计数E花环数，算出总花环形成率。
正常值为60%~80%。
【结果观察】
高倍镜检查：淋巴细胞呈蓝色，SRBC呈红色围绕淋巴细胞形成花环，凡表面粘附有3个或3个以上SRBC者为花环形成细胞（即E阳性细胞）。
计数200个淋巴细胞，算出花环形成百分率，并推测其T淋巴细胞百分率。正常值为：50～80%。

花环形成百分率%=

花环形成细胞