病毒的纯化与保存.pptx

病毒纯化和保留病毒纯化目标(了解)病毒纯化原理(熟悉)病毒纯化普通标准(熟悉)细胞破碎方法(熟悉)病毒纯化方法聚乙二醇(PEG)浓缩法不一样分子量PEG性质比较聚乙二醇(PEG)浓缩法(掌握)聚乙二醇(PEG)浓缩法(掌握)聚乙二醇(PEG)浓缩法(掌握)超出滤法(熟悉)吸附法(熟悉)凝胶吸附法-磷酸钙凝胶凝胶吸附法-氢氧化锌凝胶凝胶吸附法-焦磷酸镁凝胶红细胞吸附法(熟悉)葡聚糖柱层析法(熟悉)葡聚糖柱层析法(熟悉)葡聚糖柱层析法葡聚糖柱层析法差速离心法(掌握)惯用方法(熟悉)：以低速(-3000r/min)及中速(10000r/min)离心20-30分钟去除较大宿主细胞碎片、污染细菌及其它较大杂质，再选择较高速度离心1-2h使病毒沉淀。密度梯度离心10％～40％蔗糖密度梯度制备梯度混合仪等密度梯度离心(掌握)病毒蛋白分离SDS-PAGEPAGE：聚丙烯酰胺凝胶电泳连续与不连续PAGE不连续PAGESDS-PAGESDS-PAGE浓缩胶首次应用SDS-PAGE论文(了解)SDS-PAGE试验步骤(熟悉)1、清洗、烘干、组装电泳器材SDS-PAGE试验步骤2、1%琼脂封底SDS-PAGE试验步骤4、灌注分离胶SDS-PAGE试验步骤5、配制、灌注浓缩胶，插上梳子SDS-PAGE试验步骤5、往电泳槽加电泳缓冲液，上样电泳缓冲液(电极缓冲液)包含SDS普通配制成10×或5×SDS-PAGE试验步骤7、电泳结束，剥胶，染色，脱色按下式计算相对迁移率：每个蛋白标准分子量对数对它相对迁移率作图得标准曲线，量出未知蛋白迁移率即可测出其分子量，这么标难曲线只对同一块凝胶上样品分子量测定才含有可靠性。当蛋白质分子量在15,000－200,000之间时，样品迁移率与其分子量对数呈线性关系。符合以下方程式：LgMW=－bmR+K其中，MW为蛋白质分子量，mR为相对迁移率，b为斜率，K为截距。当条件一定时，b与K均为常数所以经过已知分子量蛋白与未知蛋白比较，就能够得出未知蛋白分子量注意问题WesternBlot蛋白质判定WesternBlot蛋白质判定WesternBlot步骤(熟悉)WesternBlot步骤WesternBlot步骤WesternBlot步骤WesternBlot步骤WesternBlot步骤病毒保留(掌握)病毒保留病毒保留2、冷冻干燥保留步骤2、冷冻干燥保留步骤2、冷冻干燥保留步骤小结