经口急性毒性实验.pptx

经口急性毒性实验急性毒性试验一、试验目标急性毒性作用：指机体一次接触或二十四小时内屡次接触化学物后在短期（最长到14天）内所发生毒性效应，包含普通行为、外观改变、大致形态改变以及死亡效应。LD50：半数致死剂量指导起一组受试试验动物半数死亡剂量。常见以表示急性毒性大小。其值越小，表示外源化学物毒性越强；反之，毒性越低。LD50是经过统计学计算得到毒性参数，是一个统计量，受试验动物个体易感性差异影响较小，所以是最主要急性毒性参数。二、试验原理三、材料和试剂四、操作步骤剂量设计改进寇氏法1、剂量设置：雌雄，等比数级，灌胃容量：0.1ml/10g雌LD100=240mg/kg,LD0=90mg/kg,k=1.28雄LD100=250mg/kg,LD0=100mg/kg,k=1.26㈠雌性5个剂量组各组浓度㈡雄性5个剂量组各组浓度240mg/Kg24mg/ml250mg/kg25mg/ml187.5mg/Kg18.8mg/ml198.4mg/kg19.8mg/ml146.5mg/Kg14.7mg/ml157.4mg/kg15.7mg/ml114.4mg/Kg11.4mg/ml125.0mg/kg12.55mg/ml90mg/Kg9mg/ml100mg/kg10mg/ml各组浓度＝各组剂量/灌胃容量例雌性最高剂量组浓度＝最高剂量/灌胃容量＝240mg/kg/0.1ml/10g＝24mg/ml2、每组实际需要量V＝最终体积＋损耗量＝动物数×平均体重×灌胃容量＋损耗量＝10×25g×0.1ml/10g+2.5ml＝5ml3、雌性最高剂量组溶液(即母液)：雄性最高剂量组溶液（母液）：24mg/ml配置22.9ml25mg/ml配制24.2ml雌A＝V*K/(K-1)雄A=V*K/(K-1)＝5*1.28/(1.28－1)=5*1.26/(1.26-1)＝22.9ml=24.2ml4、下一组溶液配置：等比稀释法A*（1/K）雌性=A×（1/k）=22.9×(1/1.28)=17.9ml雄性=A×（1/k）=24.2×(1/1.26)=19.2ml从最高剂量组溶液Aml中取出5ml,作为高剂量组。剩下(A-5)ml,加油5ml，混匀后，再从中取出5ml作为下一个剂量组，依次类推，完成时，最低剂量组体积为A，其余各组体积均为5ml.经口染毒中毒体征和动物死亡情况观察1、中毒过程：潜伏期、中毒期、恢复期或死亡时间（只需统计中毒出现时间＆死亡时间）2、中毒症状：参考《毒理学基础》P123，表6-13、死亡判断：呼吸、心跳停顿，瞳孔扩散4、尸体解剖：目标判断发生毒作用靶器官，排除动物意外死亡★急性毒性试验原始统计（14天）受试物名称：敌敌畏受试物性状：乳油受试物起源：毒理试验室动物种属品系：小鼠，昆明种动物起源：同济医学院试验动物中心染毒路径：经口灌胃室温：日期：★LD50计算结果计算与分析计算公式：m=lgLD50＝Xk－i（∑p－0.5）Sm=式中Xk：最大剂量对数值q：存活率∑p：各剂量组死亡率总和n：各组动物数Sm：标准差i:相邻两剂量组之对数剂量差值lgLD50及95%可信区间=m±1.96*Sm反对数求出LD50及95%可信区间LD50：注明动物种属，品系，性别，路径，受试物纯度经口急性毒性实验等级LD50意义实习汇报要求1、说明受试物基础情况（名称、纯度、状态等）和配制方法；2、试验动物种属、等级。试验前动物禁食情况和健康情况；3、染毒剂量（两人小组）和动物分组，体重范围；4、染毒时间，染毒连续时间，染毒后动物中毒主要表现、死亡情况及发生时间；5、按剂量组列表说明每组动物数、性别、出现毒效应动物数、死亡动物数；(雌雄大组）6、确定LD50方法；7、LD50及其95%可信限计算和结果；8、受试物毒性分级依据、毒性等级。9、各组死亡数没有剂量效应关系原因分析平均体重