生物化学核酸的生物合成专家讲座.pptx

教学目标13.1DNA生物合成13.2RNA生物合成DNA复制——依赖于DNADNA合成，是主要合成方式。逆转录——依赖于RNADNA合成，主要在病毒中，是转录逆过程。DNA损伤与修复——DNA损伤后，DNA片段填补。13.1.1DNA复制—由亲代DNA合成两个相同子代DNA过程3.证据：嘧度梯度离心试验。非常有名试验是用原核生物（大肠杆菌）做。15N（重N）培养基，培养若干代，大量繁殖使全部N都被标上15——15N，称为原代，将原代接种到14N（普通N）培养基，第一代取DNA，继续培养后取第二代、第三代DNA进行绿化铯（CsCl）密度梯度离心，用溴化乙啶（EB）染料染色，在紫外光下，有DNA发出桔黄色荧光。结果以下列图：4.参加DNA复制相关物质E.Coli中DNA聚合酶真核生物DNA聚合酶（2）DNA连接酶：（4）拓扑异构酶拓扑是物理学上一个名称，空间异构意思。用于解开DNA超螺旋结构，TOPＩ——打开一条链；TOPⅡ从中间剪开。13.1.1DNA复制—由亲代DNA合成两个相同子代DNA过程随从链（后随链）：复制方向与解链方向相反，须等候解开足够长度链才能继续复制，所得到一条由不连续片段组成子链。领头链合成随从链合成13.1.1DNA复制—由亲代DNA合成两个相同子代DNA过程13.1.1DNA复制—由亲代DNA合成两个相同子代DNA过程DNA复制过程归纳13.1.1DNA复制—由亲代DNA合成两个相同子代DNA过程（富含AT区）逆转录酶：以RNA为模板，dNTP为底物，催化5端到3端方向合成DNA酶（RDDP）或反转录酶，是1970年在劳氏肉瘤、鼠白血病病毒中发觉引起生物致癌酶。逆转录特点：（1）模板为单链RNA；（2）逆转录酶（RnaseH）含有专一切除RNA—DNA杂交分子中RNA功效。（3）引物为tRNA（4）底物为dNTP病毒RNA假如病毒中,逆转录生成DNA复制,就能够得到致癌DNA复制品，侵染宿主后，整合到宿主DNA中，宿主DNA就会有致癌DNA片段，结果引发宿主细胞发生癌变。假如能找到这类酶（逆转录酶等）抑制剂，就能够在不损害健康细胞基础上到达治疗肿瘤目标，然而，至今为止还未找到这种专一性抑制剂，需要继续努力。DNA损伤是指一些物理、化学原因影响致使DNA局部结构发生改变现象。DNA损伤可造成突变或致死。损伤原因物理（紫外（见下页）、高能射线、电离辐射）化学（烷基化试剂、亚硝酸盐、碱基类似物）生物原因（碱基对置换、碱基插入/缺失造成移码）二聚体形成后，不能配对，复制有问题。生物体要想方法修复。13.1DNA生物合成UV13.1DNA生物合成13.1DNA生物合成13.1DNA生物合成13.1DNA生物合成变性：反应混合物被短期（15—30秒）加热至950C,使得模板双链DNA变性形成可作为DNA合成单链。复性：混合物被快速冷却到某一温度，该温度允许引特结合到模板DNA侧翼序列上。延伸：混合物温度被升到700C（通常），并在预先设定时间内保持该温度，使得DNA聚合酶经过拷贝单链模板延伸个引物。所以在反应结束时，两个单链模板都形成双链，双链新生链下延伸长度是可变。转录特点：不对称转录：转录时，双链DNA中只有一条链作为转录模板，这种转录方式称作不对称转录。13.2RNA生物合成转录酶——RNA聚合酶（DDRP）原核生物（大肠杆菌）RNA聚合酶生物化学核酸的生物合成专家讲座真核生物RNA聚合酶13.2RNA生物合成-35识别解链起始延伸终止转录复合物：RNA-pol(关键酶)…DNA…RNA转录与复制比较——相同13.2RNA生物合成13.2RNA生物合成剪切剪接碱基修饰方式：（1）甲基化如：AAn（2）还原反应如：UDHU(3)核苷内转位反应如：Uψ(4)脱氨反应如：AI13.2RNA生物合成定义：RNA指导下RNA合成。在没有DNA，只有RNA病毒中，如RNA噬菌体，烟草花叶病毒等，仅存在RNA指导下RNA聚合酶，此酶催化以RNA为模板，四种NTP为原料，聚合成RNA。复制过程：先合成新负链（与模板链互补链）——早期产物；再合成新正链（与模板链相同链）——最终产物。思索与练习