用于生产抗体检测试剂的方法及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CN104380106A(43)申请公布日(43)申请公布日2015.02.25(21)申请号201380028339.6(51)Int.Cl.(22)申请日2013.03.29G01N33/543(2006.01)C07K14/705(2006.01)(30)优先权数据C07K14/82(2006.01)2012-0827352012.03.30JPC07K17/00(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日G01N33/574(2006.01)2014.11.28(86)PCT国际申请的申请数据PCT/JP2013/0596922013.03.29(87)PCT国际申请的公布数据WO2013/147233JA2013.10.03(71)申请人二见淳一郎地址日本冈山县申请人迈世耐特股份公司(72)发明人二见淳一郎垣见和宏前川隆司白木正人(74)专利代理机构北京市中咨律师事务所11247代理人史文静黄革生权利要求书1页说明书17页序列表13页附图10页(54)发明名称用于生产抗体检测试剂的方法及其用途(57)摘要本发明提供了以下内容：用于有效生产抗体检测试剂的方法，所述试剂特异的结合存在于液体样品中的不溶性抗原蛋白质；由所述生产方法生产的抗体检测试剂；和所述抗体的用途。在用于溶解抗原蛋白质的步骤中，通过利用阳离子化剂可以有效的溶解和回收抗原蛋白质；因此，当与常规方法相比时，可以有效的生产与载体中的多种抗原蛋白质分子结合的抗体检测试剂。CN104380106ACN104380106A权利要求书1/1页1.用于生产包含抗原蛋白质和载体的抗体检测试剂的方法，方法包括以下步骤：通过阳离子化溶解抗原蛋白质；以及使得阳离子化的抗原蛋白质与载体结合。2.根据权利要求1的用于生产抗体检测试剂的方法，其中所述抗原蛋白质是全长蛋白质。3.根据权利要求1或2的用于生产抗体检测试剂的方法，其中所述抗原蛋白质是膜蛋白。4.根据权利要求1至3的任一项的用于生产抗体检测试剂的方法，其中所述抗原蛋白质是癌症抗原蛋白质。5.根据权利要求1至4的任一项的用于生产抗体检测试剂的方法，其中通过结合阳离子化剂与抗原蛋白质的巯基实施所述阳离子化。6.根据权利要求5的用于生产抗体检测试剂的方法，其中所述阳离子化剂选自任一种的硫代磺酸酯化合物、混合的二硫化物化合物、吡啶基硫化物阳离子化剂和烷基卤化物阳离子化剂，及其混合物。7.根据权利要求6的用于生产抗体检测试剂的方法，其中所述硫代磺酸酯化合物是由下列式所示的化合物：[式1]其中R1代表具有2至20个碳原子的线性亚烷基；R2代表具有1至3个碳原子的烷基；并且n代表1至3的任意整数。128.根据权利要求7的方法，其中所述化合物是TAPS-磺酸酯，其中R是-(CH2)3-；R是CH3-；且n是1。9.根据权利要求7的用于生产抗体检测试剂的方法，其中所述化合物是TAP3S-磺酸12酯，其中R是-(CH2)3-；R是CH3-；且n是3。10.根据权利要求6的用于生产抗体检测试剂的方法，其中所述烷基卤化物阳离子化剂是TAP-Br。11.根据权利要求1至10的任一项的用于生产抗体检测试剂的方法，其中所述载体是磁珠。12.根据权利要求1至11的任一项的方法生产的抗体检测试剂。13.用于检测包含在样品中的抗原特异性抗体的方法，方法包括以下步骤：将根据权利要求12的抗体检测试剂与样品接触；向其加入与抗体结合的被标记的第二抗体以允许第二抗体与抗体结合；回收抗体检测试剂；以及检测与抗体结合的抗体检测试剂。14.根据权利要求13的方法，其中所述样品是分离的体液。2CN104380106A说明书1/17页用于生产抗体检测试剂的方法及其用途技术领域[0001]本发明涉及用于生产抗体检测试剂的方法。本发明还涉及由所述方法生产的抗体检测试剂及其用途。背景技术[0002]存在大量用于检测包含在液体样品中的抗体的方法，例如放射性免疫测定和酶联免疫吸附测定(ELISA)。ELISA是这样的方法，涉及：在微平板上固定特定的抗原；在连续稀释含有抗体的样品后，在微平板上实施抗原-抗体反应；使用酶标记的第二抗体检测结合的抗体。该方法需要使用独立的测定平板评估针对单个抗原的抗体测试。[0003]作为用于解决该问题的方法，已关注了一种多元技术，该技术可以利用携带报告子荧光的微珠作为固定的载体，同时分析针对多种抗原的抗体。[0004]在任何上述技术的应用中，必须以水溶性的形式制备这些多种抗原。在绝大部分情况下，通常使用可以以水溶性形式制备的天然结构的蛋白质或化学合成的多肽片段。[0005]例如，专利文献1或2中描述了用于检测包含在癌症患者的血液中的抗体的方法。该方法涉及将抗