一种DNA高通量测序建库方法.pdf
雨星****萌娃
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一种DNA高通量测序建库方法.pdf
本发明提供了一种适用于复杂环境中生物DNA的高通量测序建库方法,包括以下步骤:(1)对待测生物的基因组DNA进行片段化处理,获得DNA片段化物料;(2)对所述DNA片段化物料进行琼脂糖凝胶电泳获得电泳胶块,切取所述电泳胶块中文库目的大小的片段至比所述文库目的大小的片段大40-60bp的片段范围内的凝胶,回收凝胶内的DNA获得第一纯化DNA;(3)对所述第一纯化DNA进行末端修复,3`末端加A,连接接头序列获得连接产物,并对连接产物进行Solexa?PCR扩增,获得文库。本发明方法操作简单,能够解决复杂环境
一种真核生物DNA的Hi-C高通量测序建库方法.pdf
本发明涉及一种真核生物DNA的Hi‑C高通量测序建库方法,其中,DNA细胞核内环化步骤包括将末端修复后DNA与环化体系混合并在4‑6℃孵育2‑4h后在16‑22℃下孵育4‑6h获得内环化后物料;其中,所述环化体系的组成成分包括:T4连接酶缓冲液、BSA、T4DNA连接酶以及选自PEG4000和PEG6000中的至少一种的聚乙二醇。本发明所提供的方法能够有效的提高DNA的特性环化效率,获得明显高于传统方法的有效数据率。
一种基于高通量测序的建库方法.pdf
本发明公开了一种基于高通量测序的建库方法。该方法适用于片段化后的基因组DNA/FFPERNA/cfDNActDNA等核苷酸样本。进一步将核苷酸样本片段进行修饰与变性、接头连接,再通过对目标区进行两次特异性PCR反应富集,可得到测序文库。对上述测序文库进行质控和定量分析,可进行高通量测序。本发明还提供了一种模拟双链连接接头。该建库方法简单方便,保留了基于扩增子的多重PCR建库方法的优点,同时可以用于检测未知融合,尤其适用于片段化程度较高的核苷酸样本(例如cfDNA/ctDNA样本),对于存在损伤的DNA分
微量DNA甲基化高通量测序方法.pdf
本发明公开了一种微量DNA甲基化高通量测序方法。本发明提供的方法,依次包括如下步骤:(1)将双链DNA片段连接接头1,得到连接产物;接头1由两条单链DNA分子组成,命名为单链1‑1和单链1‑2;连接产物中,双链DNA片段的每条链的3’末端与单链1‑1的5’末端连接,双链DNA片段的每条链的5’末端与单链1‑2的3’末端相邻但不连接;(2)进行亚硫酸盐处理;(3)采用通用引物1进行DNA复制;(4)3’末端连接测序接头。
一种适用于高通量测序的破碎DNA的方法.pdf
本发明提供了一种适用于高通量测序的破碎DNA的方法,属于DNA片段制备技术领域。本发明利用超声波清洗仪对多孔PCR板内的DNA进行破碎,使每个PCR孔内待破碎DNA溶液的体积为30μl,同时保持超声波清洗仪内的双蒸水温度在14-18℃,且水面高度为4-4.5cm;根据需要获得的DNA片段的大小选择不同的超声时间。琼脂糖凝胶检测超声波清洗仪破碎后的DNA片段,发现该方法破碎DNA的效果达到国际商业化破碎DNA的效果,与后者相比,本发明方法操作简单,在实现大通量破碎DNA的同时,大大降低耗材、仪器成本,具有良