一种马来酰亚胺衍生物及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106008463A(43)申请公布日2016.10.12(21)申请号201610255328.7(22)申请日2016.04.22(71)申请人山西大学地址030006山西省太原市小店区坞城路92号(72)发明人刘涛阴彩霞霍方俊(74)专利代理机构山西五维专利事务所(有限公司)14105代理人张福增(51)Int.Cl.C07D401/12(2006.01)C09K11/06(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图4页(54)发明名称一种马来酰亚胺衍生物及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种马来酰亚胺衍生物及其制备方法和应用，所述衍生物是2-butyl-6-((2,5-dioxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-yl)amino)-1H-benzo[de]isoquinoline-1,3(2H)-dione(简称：DDPA)，中文名为2-丁基-6-((2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)氨基)-1H-苯并[异]异喹啉-1,3(2H)-二酮。它可作为检测硫醇的试剂，在pH为7.4的HEPES溶液中，利用硫醇对马来酰亚胺的迈克尔加成来定量地检测硫醇的含量。这种检测方法灵敏度高，选择性好，检测过程简便、灵敏、快速，检测结果准确。CN106008463ACN106008463A权利要求书1/1页1.一种马来酰亚胺衍生物DDPA，其特征在于，结构式为：2.如权利要求1所述的马来酰亚胺衍生物DDPA的合成方法，其特征在于，步骤为：(1)将4-溴-1,8-萘二甲酸酐和正丁胺按摩尔比1︰1.1完全溶解在乙醇中，回流；反应完成后，旋干，水洗，干燥，过柱得到白色固体N-正丁基-4-溴-1,8-萘二甲酸酐；(2)将N-正丁基-4-溴-1,8-萘二甲酸酐溶解到乙二醇甲醚中，逐渐滴加80％的水合肼，搅拌回流过夜，反应完成后，冷却，抽滤，水洗，干燥，得到黄色固体N-正丁基-4-肼基-1,8-萘二甲酸酐；(3)将N-正丁基-4-肼基-1,8-萘二甲酸酐和马来酸酐按摩尔比1:5溶解到冰乙酸中，回流6h,反应完成后，冷却，抽滤，饱和碳酸钠溶液淋洗，干燥，得到淡黄色固体即为DDPA。3.如权利要求1所述的马来酰亚胺衍生物DDPA用于检测硫醇的试剂。4.一种检硫醇的方法，其特征在于，步骤为：(1)、配制pH＝7.4、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，配制2mM的DDPA的DMSO溶液；(2)、按体积比2000:7，将体积比1:1、pH7.4的HEPES-DMSO溶液和DDPA的DMSO溶液加到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，497nm的荧光强度逐渐增强；(3)、把2mL的体积比1:1、pH7.4的HEPES-DMSO溶液、7μL的DDPA的DMSO溶液加到另一个荧光比色皿中，分别再加入Cys溶液的体积为0.70、1.40、2.10、2.80、3.50、4.20、4.90、5.60、6.30、7.00μL时，在荧光分光光度仪上测定497nm对应的荧光强度F为473、686、927、1180、1420、1665、1893、2083、2272、2518、2687，以Cys浓度为横坐标，以相对荧光强度F-F0为纵坐标绘制图，F0＝207，得到Cys浓度的工作曲线，线性回归方程为：F-F0＝3221.04c+63.48，c的单位为μM；(4)、将体积比1:1、pH7.4的HEPES-DMSO溶液2000μL和DDPA的DMSO溶液7μL加到干净的荧光比色皿中，用微量进样器吸取Vμl待测样品溶液，加入到此干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，将测得的荧光强度代入步骤(3)的线性回归方程，得到浓度c，待测样-6品C待测样＝2000μL×c×10/VμL，即可求得样品Cys的浓度。2CN106008463A说明书1/4页一种马来酰亚胺衍生物及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及硫醇检测技术，具体涉及一种马来酰亚胺衍生物及其制备方法，以及这种马来酰亚胺衍生物作为试剂在检测硫醇中的应用。背景技术[0002]硫醇在生物体系中起着关键作用。三种结构相似的小分子硫醇半胱氨酸(Cys)、同型半胱氨酸(Hcy)和谷胱甘肽(GSH)在维持生物系统中扮演着至关紧要的的角色。细胞内硫醇浓度的改变与一些疾病紧密相连，如白血球降低、牛皮癣、肝脏损伤、癌症和艾滋病。半胱氨酸(Cys)缺乏会引起很多综合疾病，如儿童生长缓慢、白化病、水肿、嗜睡症、肝脏损伤、肌肉和脂肪消损、皮肤损伤、虚弱。血浆中高水平的同型半胱氨酸(Hcy)是Alzheimer症、叶酸和维生素B12缺乏症和心血管疾病的致病因素之一。血浆中