用于确定CDC引发抗体的测定试验和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107002114A(43)申请公布日2017.08.01(21)申请号201580066560.X(74)专利代理机构北京市中咨律师事务所(22)申请日2015.12.1511247代理人张莉黄革生(30)优先权数据14198749.52014.12.18EP(51)Int.Cl.C12Q1/02(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2017.06.07(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2015/0796932015.12.15(87)PCT国际申请的公布数据WO2016/096788EN2016.06.23(71)申请人豪夫迈·罗氏有限公司地址瑞士巴塞尔(72)发明人S·奥夫纳K·齐克权利要求书1页说明书28页序列表13页附图4页(54)发明名称用于确定CDC引发抗体的测定试验和方法(57)摘要本文报道一种用于确定组合物的补体依赖性细胞毒性的方法，其中所述组合物包含：i)特异性结合第一抗原上的第一表位的第一结合位点，其与人源的第一Fc区多肽缀合，以及ii)特异性结合第一抗原上或第二抗原上的第二表位的第二结合位点，其与人源的第二Fc区多肽缀合，其中所述方法包括以下步骤：用组合物孵育表达第一抗原或第一抗原和第二抗原的人细胞；向混合物中加入兔补体；和测定细胞裂解，从而确定组合物的补体依赖性细胞毒性。CN107002114ACN107002114A权利要求书1/1页1.一种用于确定组合物的补体依赖性细胞毒性的方法，其中所述组合物包含：i)特异性结合第一抗原上的第一表位的第一结合位点，其与人源的第一Fc区多肽缀合，以及ii)特异性结合第一抗原上或第二抗原上的第二表位的第二结合位点，其与人源的第二Fc区多肽缀合，其中所述方法包括以下步骤：a)用组合物孵育表达第一抗原或第一抗原和第二抗原的人细胞，b)向a)的混合物中加入兔补体，和c)测定细胞裂解，从而确定组合物的补体依赖性细胞毒性。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含：特异性结合第一抗原上的第一表位的第一人或人源化抗体、以及特异性结合第二抗原上的第二表位的第二人或人源化抗体。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含：与第一抗原上的第一表位和第二抗原上的第二表位特异性结合的人或人源化双特异性抗体。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述组合物结合第一抗原上的第一表位以及第一抗原上的第二表位，并且第一表位和第二表位是不同的。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述第一表位和所述第二表位是非重叠表位。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中在加入补体后0.5至3小时之间测定细胞裂解。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述人细胞是人恶性瘤细胞或引起自身免疫应答的人细胞。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述人恶性瘤细胞是上皮来源的人癌细胞。9.根据权利要求7所述的方法，其中所述人恶性瘤细胞是人B细胞淋巴瘤细胞。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述方法是无血清方法。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述兔补体是幼兔补体。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述第一结合位点与所述第二结合位点的比率为0.5:1至1:0.5。2CN107002114A说明书1/28页用于确定CDC引发抗体的测定试验和方法技术领域[0001]本发明涉及用于检测/选择效应子功能引发抗体和抗体组合的测定试验和方法领域。背景技术[0002]免疫球蛋白含有用于结合某些Fc受体(如FcRn)以及Clq的两个结合位点，在重链Fc区域中各有一个。[0003]对于补体活化，需要一个以上的免疫球蛋白分子，因为单体IgG对Clq的亲和力相当弱(亲和力约为10-4M)(参见例如Sledge等人，J.Biol.Chem.248(1973)2818-2813，Hughes-Jones等人，Mol.Immunol.16(1979)697-701)。多价C1q的结合可以通过免疫球蛋白分子的基于抗原的缔合而增加，从而增加补体活化(约10-8M的亲合力)(参见例如Burton等人，Mol.Immunol.22(1990)161-206)。[0004]Clq的三维结构类似于包含六个球形头的一束郁金香，其中球形头包含抗体结合区(参见例如Perkins等人，Biochem.J.228(1985)13-26，Poon等人，J.Mol.Biol.168(1983)563-577，Reid等人，Biochem.Soc.Trans.11(1983)1-12和Weiss等人，J.Mol.Biol.189(1986)573-581)。[0005]在US5,851,528中报道了