用于确定CDC诱导抗体的测定法和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109154600A(43)申请公布日2019.01.04(21)申请号201780032734.X(74)专利代理机构北京市中咨律师事务所(22)申请日2017.06.1211247代理人柴云峰黄革生(30)优先权数据16174675.52016.06.16EP(51)Int.Cl.G01N33/50(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2018.11.27(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2017/0642722017.06.12(87)PCT国际申请的公布数据WO2017/216098EN2017.12.21(71)申请人豪夫迈·罗氏有限公司地址瑞士巴塞尔(72)发明人S·登格尔S·奥夫纳权利要求书1页说明书43页序列表16页附图10页(54)发明名称用于确定CDC诱导抗体的测定法和方法(57)摘要本文报道了一种用于确定组合物的依赖补体的细胞毒性的方法，其包括i)特异性结合第一抗原上的第一表位的第一结合位点，其与人源的第一Fc区多肽缀合，和ii)特异性结合第二抗原上的第二表位的第二结合位点，其与人源的第二Fc区多肽缀合，其中所述方法包括将表达第一抗原和第二抗原的细胞与所述组合物和抗mCRP抗体的混合物一起温育的步骤；向混合物中加入正常人血清或兔补体；确定细胞裂解，从而确定组合物的依赖补体的细胞毒性。CN109154600ACN109154600A权利要求书1/1页1.用于确定组合物的依赖补体的细胞毒性的方法，其中所述组合物包含i)特异性结合第一抗原上的第一表位的第一结合位点，所述第一结合位点与人源的第一Fc区多肽缀合，和ii)特异性结合第一抗原或第二抗原上的第二表位的第二结合位点，所述第二结合位点与人源的第二Fc区多肽缀合，其中所述方法包括以下步骤:a)将表达第一抗原或第一抗原和第二抗原的上皮来源的人癌细胞与所述组合物和抗mCRP抗体的混合物温育，b)将正常人血清或兔补体添加到a)的混合物中，和c)测定细胞裂解，从而确定组合物的依赖补体的细胞毒性。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗mCRP抗体的混合物是包含抗CD46抗体，抗CD55抗体和抗CD59抗体的混合物。3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述抗mCRP抗体具有非人Fc区。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述抗mCRP抗体具有鼠Fc区。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述抗mCRP抗体以10倍饱和浓度添加，其中所述1倍饱和浓度被定义为通过FACS分析确定的足够细胞的饱和染色的浓度。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述组合物包含特异性结合第一抗原上的第一表位的第一人或人源化抗体和特异性结合第二抗原上第二表位的第二人或人源化抗体。7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述组合物包含特异性结合第一抗原上的第一表位和第二抗原上的第二表位的人或人源化双特异性抗体。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述组合物结合第一抗原上的第一表位和第一抗原上的第二表位，并且第一表位和第二表位不同。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述第一表位和所述第二表位是非重叠表位。10.根据权利要求1-9中任一项的方法，其中在添加补体后0.5至3小时之间测定细胞裂解。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述上皮来源的人癌细胞选自人卵巢腺癌细胞和人乳腺腺癌细胞。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述上皮来源的人癌细胞选自SK-OV3细胞和MCF7细胞。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述兔补体是幼兔补体。14.根据权利要求1-13中任一项的方法，其中第一结合位点与第二结合位点的比例为0.5:1至1:0.5。2CN109154600A说明书1/43页用于确定CDC诱导抗体的测定法和方法发明领域[0001]本发明属于用于检测/选择效应子功能诱导抗体和抗体组合的测定法和方法的领域。[0002]背景[0003]免疫球蛋白含有对某些Fc受体，例如FcRn，以及Clq的两个结合位点，每个重链Fc区中一个结合位点。[0004]对于补体激活，需要多于一个免疫球蛋白分子，因为单体IgG对Clq的亲和力非常弱(亲和力约10-4M)(参见例如Sledgeetal.,J.Biol.Chem.248(1973)2818-2813,Hughes-Jonesetal.,Mol.Immunol.16(1979)697-701)。多价C1q的结合可以通过免疫球蛋白分子的基于抗原的结合，并因此补体激活而增加(亲和力约10-8M)(参见例如Burtonetal.,Mol.Immunol.22(1990)161-20