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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114778840A(43)申请公布日2022.07.22(21)申请号202210443102.5(22)申请日2022.04.25(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山路483号申请人重庆市食品药品检验检测研究院(72)发明人徐振林梁科许晶冰邓浩王炳志孙远明(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102专利代理师段卉(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)G01N33/558(2006.01)权利要求书2页说明书13页附图8页(54)发明名称一种检测啶氧菌酯的试剂盒及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种检测啶氧菌酯的试剂盒及其制备方法和应用,本发明制备的啶氧菌酯半抗原最大程度保留了啶氧菌酯的特征结构,使啶氧菌酯半抗原的免疫原性明显增强,得到的啶氧菌酯单克隆抗体灵敏度高,通过ELISA检测技术,对啶氧菌酯的最低检测限为0.5μg/L;啶氧菌酯半抗原的制备方法的反应操作简单,反应条件易控制,制备的啶氧菌酯半抗原的纯度和收率高。本发明制备的啶氧菌酯荧光定量免疫层析试纸条的检测灵敏度可达1μg/L,精密度高,在室温下能稳定保存一年以上,利于保存和运输,能够实现啶氧菌酯的快速定量检测。CN114778840ACN114778840A权利要求书1/2页1.式Ⅱ所述化合物作为啶氧菌酯半抗原的应用,式Ⅱ结构式如下所示:2.式Ⅱ所示的啶氧菌酯半抗原在制备啶氧菌酯人工抗原中的应用,式Ⅱ结构式如下所示:3.一种啶氧菌酯人工抗原,其特征在于,为式Ⅱ所示的啶氧菌酯半抗原与载体蛋白偶联所得,载体蛋白为血蓝蛋白或牛血清白蛋白,啶氧菌酯人工抗原的结构式如式Ⅲ所示:2CN114778840A权利要求书2/2页4.权利要求3所述啶氧菌酯人工抗原在制备啶氧菌酯人工抗体中的应用。5.一种啶氧菌酯单克隆抗体,其特征在于,是以权利要求3所述啶氧菌酯人工抗原为免疫原制备得到。6.一种酶联免疫检测啶氧菌酯的免疫原与包被原的组合物,其特征在于,所述免疫原和包被原为权利要求3所述人工抗原;所述免疫原上的载体蛋白为血蓝蛋白,所述包被原上的载体蛋白为牛血清白蛋白。7.权利要求3所述啶氧菌酯人工抗原或权利要求5所述啶氧菌酯单克隆抗体在制备检测啶氧菌酯产品中的应用。8.一种检测啶氧菌酯的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中含有啶氧菌酯荧光定量免疫层析试纸条和检测液,所述啶氧菌酯荧光定量免疫层析试纸条包括层析膜、样品垫、吸水垫和PVC板;所述层析膜的检测区包被有权利要求3所述啶氧菌酯人工抗原,作为T线,所述层析膜的质控区包被有羊抗兔IgG,作为C线;所述检测液中含有荧光微球标记的抗体,所述抗体为权利要求5所述啶氧菌酯单克隆抗体。9.根据权利要求8所述检测啶氧菌酯的试剂盒,其特征在于,所述啶氧菌酯人工抗原的包被浓度为0.2~0.8mg/mL,羊抗兔IgG的包被浓度为0.1~0.5mg/mL,所述检测液中荧光微球标记的抗体的稀释倍数为80~200倍。10.根据权利要求8所述检测啶氧菌酯的试剂盒,其特征在于,所述样品垫的处理液中含有质量浓度0.48~0.52%BSA、2.8~3.2%蔗糖、0.05~0.10%Triton100的0.01~0.05MPBS缓冲液。3CN114778840A说明书1/13页一种检测啶氧菌酯的试剂盒及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及免疫化学技术领域,具体地,涉及一种检测啶氧菌酯的试剂盒及其制备方法和应用。背景技术[0002]啶氧菌酯(Picoxystrobin),化学名称为(E)‑3‑甲氧基‑2‑{2‑[6‑(三氟甲基)‑2‑吡啶氧甲基]苯基}丙烯酸甲酯,分子式:C18H16F3NO4,相对分子量:367.32。啶氧菌酯是一种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂,最早是2001年由先正达公司开发,杜邦公司在2006年收购该产品后,开始在全世界进行大范围的推广应用,啶氧菌酯于2012年获得中国农业部正式登记。这是一种内吸性杀菌剂,主要用于防治农作物的病害,如叶枯病、叶锈病、颖枯病、褐斑病、白粉病、网斑病、白腐病和霜霉病等,因此,啶氧菌酯应用十分广泛,在烟草、小麦、水稻、葡萄、辣椒、香蕉、马铃薯和黄瓜等农产品中均有报道;与此同时,专家学者对于啶氧菌酯的残留研究也重视起来。有试验表明,啶氧菌酯在土壤中的稳定性好、迁移率低,但长期高频次施用容易导致土壤中啶氧菌酯累积。2017年,欧盟委员会发布了会逐步废除啶氧菌酯的登记使用的决定,主要是担心其代谢物IN‑H8612的致畸变和细胞遗传毒性的风险,同时其代谢物IN‑QDY68对水生生物及以蚯蚓为食的哺乳动物具有高风险。目前中国、加拿大、美国和欧盟均制订了啶氧菌酯在农产品中的最大残留限量(MRL)。作为