一种利用嗜热脂肪芽孢杆菌突变菌生产芽孢的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108865937A(43)申请公布日2018.11.23(21)申请号201810759493.5(22)申请日2018.07.11(83)生物保藏信息CGMCCNo：155592018.04.08(71)申请人青岛高迈生物科技有限公司地址266100山东省青岛市市南区山东路9号深业中心大厦A座10层H户(72)发明人鲁勇王莹(74)专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350代理人汤东凤(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12N3/00(2006.01)C12R1/01(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称一种利用嗜热脂肪芽孢杆菌突变菌生产芽孢的方法(57)摘要本发明提供一种制备芽孢的方法，所述的方法是将嗜热脂肪土芽孢杆菌YB1-1株通过划线接种于菌种活化培养基上进行培养；再将活化后的YB1-1株接种于芽孢扩增培养基置于水浴摇床中进行培养。本发明方法所使用的嗜热脂肪芽孢杆菌，为嗜热脂肪土芽孢杆菌YB1-1株，于2018年4月8日保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo：15559。本发明的方法培养过程的YB1-1菌株的芽孢产率达到80％以上。另外，本发明的方法仅需两个步骤，最短耗时32h便可获得大量芽孢，且上述产芽孢过程具有良好重复性。能够满足大规模商业生产的需求。CN108865937ACN108865937A权利要求书1/1页1.一种制备芽孢的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)菌种活化：将嗜热脂肪土芽孢杆菌通过划线接种于菌种活化培养基上进行培养；2)芽孢扩增：将活化后的嗜热脂肪土芽孢杆菌接种于芽孢扩增培养基置于水浴摇床中进行培养；其中水浴摇床培养温度为55-60℃；摇床转速为120-150r/min；培养时间为24-48h。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)的培养温度为60-65℃；培养时间为8-14h。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)所述的菌种活化培养基按照重量百分比组成如下：营养琼脂2-3.5％，CaCl20.01-0.05％，FeSO4·7H2O0.001-0.005％，MnCl2·4H2O0.1-0.5％，MgSO40.01-0.05％。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)所述的芽孢扩增培养基，其质量百分比组成如下：营养肉汤1.5％，CaCl20.05-0.1％，FeSO4·7H2O0.001-0.005％，MnCl2·4H2O0.5-1％，MgSO40.01-0.05％，羧甲基纤维素钠0.1-0.5％。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的嗜热脂肪芽孢杆菌，为嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)YB1-1株，于2018年4月8日保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo：15559。2CN108865937A说明书1/3页一种利用嗜热脂肪芽孢杆菌突变菌生产芽孢的方法技术领域[0001]本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及一种利用嗜热脂肪芽孢杆菌突变菌生产芽孢的方法。背景技术[0002]芽孢为细菌停止生长时所产生的休眠体，芽孢对低温、高温、干旱等不良环境有很强的抵抗力，而嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢萌发产酸不产气，溴甲酚紫指示剂在酸性条件下会由紫色变为黄色，利用此原理可用来快速检测乳品中抗生素残留情况。人如果长期食用抗生素含量超标的牛奶会导致人体产生耐药性，使体内菌群失调，造成严重不良后果。利用嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢检测牛奶中抗生素残留是目前为止最为快速便捷经济的方式。[0003]目前嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的制备主要有固体发酵和液体发酵两种方法。固体发酵方法所得的芽孢产量小，不适合大规模生产，液体发酵方法可以弥补固体发酵法产量小的不足，是工业生产最适合的方法。但目前液体制备嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的工艺繁琐、产芽孢率不稳定，因此急需对液体发酵方法进行改进。发明内容[0004]本发明的目的是提供一种利用嗜热脂肪芽孢杆菌突变菌生产芽孢的方法，即一种操作简便、产孢率稳定的液体发酵芽孢制备方法，从而弥补现有技术的不足。[0005]本发明首先提供一种制备芽孢的方法，所述的方法包括如下的步骤：[0006]1)菌种活化：将嗜热脂肪土芽孢杆菌YB1-1株通过划线接种于菌种活化培养基上进行培养；[0007]培养温度为60-65℃；培养时间为8-14h。[0008]2)芽孢扩增：将活化后的YB1-1株接种于芽孢扩增培养基置于水浴摇床中进行培养；[000