一种嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的制备和萌发方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110862953A(43)申请公布日2020.03.06(21)申请号201911320707.XC12R1/01(2006.01)(22)申请日2019.12.19(71)申请人深圳市安达医疗感控科技有限公司地址518000广东省深圳市龙华区观湖街道松元厦社区虎地排114号锦绣大地厂房4号楼201(72)发明人涂兴辉贾红伟(74)专利代理机构深圳市康弘知识产权代理有限公司44247代理人万景旺(51)Int.Cl.C12N3/00(2006.01)C12N1/20(2006.01)C12Q1/02(2006.01)C12Q1/18(2006.01)权利要求书1页说明书12页(54)发明名称一种嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的制备和萌发方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的制备和萌发方法及其应用，属于应用微生物技术领域。所述制备、萌发方法包括：（1）菌种活化；（2）芽孢制备；（3）芽孢萌发。本发明进一步包括芽孢快速复苏的萌发培养基及芽孢的应用。利用本发明制备嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢，芽孢产量高，制备周期短，抗性调节性大，采用液体诱导培养基，较固体平板诱导具有芽孢收集简单，可大规模制备等优势，并且适用于空间灭菌指示物的工作菌，如消毒学中的压力蒸汽灭菌，过氧化氢低温等离子体灭菌及鲜乳中抗生素残留检测等。CN110862953ACN110862953A权利要求书1/1页1.一种嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：菌种活化：用PBS缓冲液将嗜热脂肪地芽孢杆菌菌株G.stearothermophilusATCC7953冻干粉制备成菌悬液，涂布于活化培养基上进行活化；菌种制备：将活化的菌种接种到增殖培养基，振荡培养10-20h；芽孢诱导：将菌种接种至诱导培养基中进行诱导培养，收集嗜热脂肪地芽孢杆菌菌体及芽孢，去除菌体后即得到嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤（2）和步骤（3）之间进一步包括将菌种进行再次增殖的步骤。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述再次增殖的步骤为：将步骤（2）获得的菌种接种于增殖培养基中增殖培养10-20h；或将步骤（2）获得的菌种接种于诱导培养基中增殖培养10-20h。4.根据权利要求1-3任一所述的制备方法，其特征在于，所述活化培养基为TSA培养基，1000mL体系如下：胰蛋白胨15g，大豆蛋白胨5g，氯化钠5g，琼脂16g，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2±0.2；所述增殖培养基为TSB培养基，1000mL体系如下：胰蛋白胨17g，大豆蛋白胨3g，氯化钠5g，葡萄糖2.5g，无水磷酸氢二钾2.5g，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2±0.2。5.根据权利要求1-3任一所述的制备方法，其特征在于，所述诱导培养基1000mL体系如下：胰蛋白胨3.0-12g，酸水解酪蛋白1.0-6.0g，酵母提取粉1.0-6.0g，牛肉浸粉1.0-6.0g，氯化钾10.0-60.0mg，氯化钙0.1-0.6g，氯化锰2.0-20.0mg，硫酸镁0.2-0.8mg，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2±0.2。6.一种诱导嗜热脂肪地芽孢杆菌产生芽孢的诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基1000mL体系如下：胰蛋白胨3.0-12g，酸水解酪蛋白1.0-6.0g，酵母提取粉1.0-6.0g，牛肉浸粉1.0-6.0g，氯化钾10.0-60.0mg，氯化钙0.1-0.6g，氯化锰2.0-20.0mg，硫酸镁0.2-0.8mg，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2±0.2。7.利用权利要求1所述的制备方法制备的嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的萌发方法，其特征在于，包括将所述芽孢加至萌发培养基中的步骤，其中所述萌发培养基1000mL体系如下：蛋白胨5-20g，可溶性淀粉0.5-7.0g，果糖0.2-5.0g，蔗糖0.2-5.0g，麦芽糖0.2-5.0g，L-丙氨酸0.1-3.0g，L-天冬酰胺0.05-0.30g，溴甲酚紫0.01-0.10g，磷酸氢二钾0.25-2.5g，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2-7.4。8.一种促进嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢萌发的培养基，其特征在于，所述培养基1000mL体系如下：蛋白胨5-20g，可溶性淀粉0.5-7.0g，果糖0.2-5.0g，蔗糖0.2-5.0g，麦芽糖0.2-5.0g，L-丙氨酸0.1-3.0g，L-天冬酰胺0.05-0.30g，溴甲酚紫0.01-0.10g，磷酸氢二钾0.25-2.5g，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2-7.4。9.利用权利要求1所述的制备方法制备的嗜热脂肪地芽孢杆菌