用于测定25-羟基维生素D的试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109188002A(43)申请公布日2019.01.11(21)申请号201811070237.1(22)申请日2018.09.13(71)申请人迈克生物股份有限公司地址611731四川省成都市高新区百川路16号(72)发明人李洪伟吴国平田君喜(74)专利代理机构北京派特恩知识产权代理有限公司11270代理人陈万青张颖玲(51)Int.Cl.G01N33/82(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书2页说明书10页(54)发明名称用于测定25-羟基维生素D的试剂盒(57)摘要本申请公开了一种25-羟基维生素D检测试剂盒，所述25-羟基维生素D检测试剂盒包括：第一试剂，所述第一试剂包括在酸性缓冲溶液中的第一磁微粒和第二磁微粒，其中所述第一磁微粒是包被有链酶亲和素的磁微粒，所述第二磁微粒是与所述第一磁微粒不同的非特异性磁微粒；第二试剂，所述第二试剂包括25-羟基维生素D抗体标记物；和第三试剂，所述第三试剂包括生物素化的25-羟基维生素D。本发明的试剂盒同时适用于在血清和血浆样品中检测25-羟基维生素D，而不需额外的样本处理试剂，也不需额外的处理样品的步骤。CN109188002ACN109188002A权利要求书1/2页1.一种25-羟基维生素D检测试剂盒，所述25-羟基维生素D检测试剂盒包括：第一试剂，所述第一试剂包括在酸性缓冲溶液中的第一磁微粒和第二磁微粒，其中所述第一磁微粒是包被有链酶亲和素的磁微粒，所述第二磁微粒是与所述第一磁微粒不同的非特异性磁微粒；第二试剂，所述第二试剂包括25-羟基维生素D抗体标记物；和第三试剂，所述第三试剂包括生物素化的25-羟基维生素D。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述第一试剂中，所述第一磁微粒的浓度为0.1-1mg/mL，优选为0.1-0.4mg/mL，最优选为0.2mg/mL。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述第一试剂中，所述第二磁微粒为表面被-COOH、-Tosyl、-NH2或-OH改性的磁微粒。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述第一试剂中，所述第二磁微粒的浓度为0.4-1mg/mL，优选为0.4-0.8mg/mL，最优选为0.6mg/mL。5.根据权利要求1-4中任一项所述的试剂盒，其中，所述第一试剂中，所述第二磁微粒与第一磁微粒的质量比为2:1-8:1，优选为2:1-4:1，最优选为3:1。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述酸性缓冲溶液的pH值为3.00-6.00。7.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述第一试剂由pH3.00-6.00的缓冲液、0.1-0.4mg/mL的所述第一磁微粒、0.4-0.8mg/mL的所述第二磁微粒组成；优选地，所述第一试剂由pH为4.5的0.2M的醋酸-醋酸钠缓冲液、粒径为1.5μm的0.2mg/mL的包被有链酶亲和素的所述第一磁微粒和粒径为1.5μm的0.6mg/mL的表面修饰有羧酸的所述第二磁微粒组成。8.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述第二试剂中的所述25-羟基维生素D抗体标记物为选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、吖啶酯和三联吡啶钌中的一种；优选地，在第二试剂中，所述25-羟基维生素D抗体标记物的浓度为50-200ng/mL，优选80-130ng/mL，最优选为100ng/mL；更优选地，所述第二试剂由0.1mol/L的Tris-Hcl缓冲液、8.5g/L的氯化钠、20g/L的蔗糖、20g/L的聚乙二醇20000、1mL/L的Procline950、0.5mL/L的吐温-20、100ng/mL的辣根过氧化物酶标记的25-羟基维生素D抗体组成。9.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述第三试剂中，所述生物素化的25-羟基维生素D的浓度通常为0.5-2ng/mL，优选为1ng/mL；优选地，所述第三试剂由0.1mol/L的Tris-Hcl缓冲液、8.5g/L的氯化钠、20g/L的蔗糖、1mL/L的Procline950、0.5mL/L的吐温-20、1ng/mL的生物素化的25-羟基维生素D组成。10.根据权利要求1所述的试剂盒，包括：第一试剂，所述第一试剂包括在pH3.00-6.00的酸性缓冲溶液中的质量比为2:1-4:1第二磁微粒和第一磁微粒，其中所述第一磁微粒是包被有链酶亲和素的磁微粒，所述第二磁微粒是表面修饰有羧基、甲苯磺酰基、氨基或羟基的非特异性磁微粒；第二试剂，所述第二试剂含有由辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、吖啶酯或三联吡啶钌标记的25-羟基维生素D抗体；第三试剂，所述第三试剂含有生物素化的25-羟基维生素D，优选地，所述试剂盒包括：2CN109188002A权利要求书2/2页第一试剂，所述第一试剂由pH