土沉香、云南沉香、马来沉香的SNP分子标记及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109486978A(43)申请公布日2019.03.19(21)申请号201711397665.0(22)申请日2017.12.22(66)本国优先权数据201710814112.42017.09.11CN(71)申请人杭州百迈生物股份有限公司地址311228浙江省杭州市大江东产业集聚区临江高新区纬五路3688号科创园2幢四层(72)发明人林源吉丁佳女郑宜文(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书9页序列表3页附图4页(54)发明名称土沉香、云南沉香、马来沉香的SNP分子标记及其应用(57)摘要本发明公开了一种用于鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香的SNP分子标记及其应用。本发明基于SNP分子标记建立起了快速鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香的体系，从而实现了快速、准确检测土沉香、云南沉香、马来沉香的目的，对于口岸物种检验工作等具有重大的意义。CN109486978ACN109486978A权利要求书1/2页1.用于鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香的SNP分子标记，其特征在于，所述SNP分子标记位于SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示序列的第190-191碱基，若第190-191位的碱基为GT则鉴定为土沉香，若第190-191碱基为TT则鉴定为云南沉香，若第190-191碱基为CC则鉴定为马来沉香。2.权利要求1所述SNP分子标记在土沉香、云南沉香、马来沉香鉴定中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，从土沉香、云南沉香、马来沉香混合树种中分别鉴定出土沉香、云南沉香、马来沉香。4.用于鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列包括SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3，或者SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所对应的cDNA或mRNA，所述核苷酸序列的第190-191位的碱基为GT则鉴定为土沉香，若第190-191碱基为TT则鉴定为云南沉香，若第190-191碱基为CC则鉴定为马来沉香。5.一种鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香的试剂盒，其特征在于，包括用于特异性检测SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3序列第190-191位的碱基为GT、TT或CC的一种或多种引物，或引物和探针的组合。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述引物和/或探针选自：用于测序检测的特异性扩增引物和测序引物，引物序列分别为：上游引物F1：5'-CGTAACAAGGTTTTCGTAGGTGAAC-3'下游引物R1：5'-GCTACGTTCTTCATCGAT-3'测序引物：5'-CGTAACAAGGTTTTCGTAGGTGAAC-3'；或者，用于HRM-PCR方法鉴定的扩增特异性扩展引物，引物序列为：上游引物F2：5’-AAGGAACTTGATCACATAATATGTT-3’下游引物R2：5’-TCATTTTAGATTCGTTTCAACGC-3’；或者，用于ARMS-PCR扩增的特异性引物，引物序列为：上游引物FP：5’-CTTGTGGCCGTCATAACCAAACC-3’土沉香下游引物TR：5’-CGTTTCAACGCTTGATCTCA-3’云南沉香下游引物YR：5’-CGTTTCAACGCTTGATCTAA-3’马来沉香下游引物MR：5’-CGTTTCAACGCTTGATCTGG-3’。7.一种制备鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香试剂盒的方法，包括制备检测反应试剂的步骤，其特征在于，所述反应试剂包含用于特异性检测SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3序列第190-191位的碱基为GT、TT或CC的一种或多种引物，或引物和探针的组合。8.用于鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸用于特异性检测SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3序列第190-191位的碱基为GT、TT或CC的一种或多种引物，或引物和探针组合，所述寡核苷酸选自用于测序的特异性扩增引物序列和测序引物序列，分别为上游引物F1：5'-CGTAACAAGGTTTTCGTAGGTGAAC-3'下游引物R1：5'-GCTACGTTCTTCATCGAT-3'测序引物：5'-CGTAACAAGGTTTTCGTAGGTGAAC-3'；或者，用于HRM-PCR方法鉴定的扩增特异性上游引物F2序列、下游引物R2序列分别为：上游引物F2：5’-AAGGAACTTGATCACATAATATGTT-3’2CN109486978A权利要求书2/2页下游引物R2：5’-TCATTT