土沉香、云南沉香、马来沉香的SNP分子标记及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109486983A(43)申请公布日2019.03.19(21)申请号201711398258.1(22)申请日2017.12.22(66)本国优先权数据201710814112.42017.09.11CN(71)申请人杭州百迈生物股份有限公司地址311228浙江省杭州市大江东产业集聚区临江高新区纬五路3688号科创园2幢四层(72)发明人林源吉丁佳女郑宜文(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书10页序列表4页附图9页(54)发明名称土沉香、云南沉香、马来沉香的SNP分子标记及应用(57)摘要本发明公开了一种用于鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香的SNP分子标记，所述SNP分子标记位于SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示序列的第81-84位碱基为TGCC则鉴定为土沉香，若第81-84位为碱基为CGCT则鉴定为云南沉香，若第81-84位碱基为CGCC则鉴定为马来沉香。本发明基于SNP分子标记建立起了快速鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香的体系。从而达到快速、准确检测土沉香、云南沉香、马来沉香的目的，对于口岸物种检验工作等具有重大的意义。CN109486983ACN109486983A权利要求书1/2页1.用于鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香的SNP分子标记，其特征在于，所述SNP分子标记位于SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示序列的第81-84位碱基为TGCC则鉴定为土沉香，若第81-84位碱基为CGCT则鉴定为云南沉香，若第81-84位碱基为CGCC则鉴定为马来沉香。2.权利要求1所述SNP分子标记在土沉香、云南沉香、马来沉香鉴定中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，从土沉香、云南沉香、马来沉香混合物种中分别鉴定出土沉香、云南沉香、马来沉香。4.用于鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香的寡核苷酸，其特征在于，所述核苷酸包括SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3，或者SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所对应的cDNA或mRNA，所述核苷酸序列的第81-84位碱基为TGCC则为土沉香，若第81-84位碱基为CGCT则为云南沉香，若第81-84位碱基为CGCC则为马来沉香。5.一种鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香的试剂盒，其特征在于，包括用于特异性检测SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3序列第81-84位碱基为TGCC或者CGCT或者CGCC的一种或多种引物，或引物和探针的组合。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述引物和/或探针选自：用于测序检测的特异性扩增引物和测序引物，引物序列分别为：上游引物F1：5'-CGTAACAAGGTTTTCGTAGGTGAAC-3'下游引物R1：5'-GCTACGTTCTTCATCGAT-3'测序引物：5'-CGTAACAAGGTTTTCGTAGGTGAAC-3'；或者，用于荧光定量PCR检测的扩增特异性扩增引物和探针，引物和探针序列分别为：上游引物F2：5'-CCGTGAACGTTAATAACAATGTGC-3'下游引物R2：5'-ATCAAGTTCCTTGGCGCAGTC-3'探针2-1：5'-FAM-GTGTCGTTATGCCCATTCCCTCCT-BHQ1-3'探针2-2：5'-HEX-GTGTCGTTACGCTCCATTCCCTCCT-BHQ1-3'探针2-3：5'-ROX-GTGTCGTTACGCCCATTCCCTCCT-BHQ1-3'；或者，用于ARMS-PCR扩增的特异性扩增引物，引物序列为：土沉香特异性引物：上游引物T1：5'-GATGCGCGCTATGATTGAAC-3'下游引物T2：5'-CGGTGTATGCCATGATGCA-3'云南沉香特异性引物：上游引物Y1：5'-GATGCGCGCTATGATTGTGT-3'下游引物Y2：5'-CGGTGTATGCCATGATGCG-3'马来沉香特异性引物上游引物M1：5'-GATGCGCGCTATGATTGTAT-3'下游引物M2：5'-CGGTGTATGCCATGATGCG-3'。7.一种制备鉴定土沉香、云南沉香、马来沉香试剂盒的方法，包括制备检测反应试剂的步骤，其特征在于，所述反应试剂包含用于特异性检测SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3序列第81-84位碱基为TGCC或者CGCT或者CGCC的一种或多种引物，或引物和探针的组合。2CN109486983A权利要求书2/2页8.用于鉴定土沉香、云