染色试剂盒及使用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110567785A(43)申请公布日2019.12.13(21)申请号201910804447.7(22)申请日2019.08.28(71)申请人迈克生物股份有限公司地址611731四川省成都市高新区百川路16号(72)发明人李立科蒋小龙(74)专利代理机构北京派特恩知识产权代理有限公司11270代理人王子晔张颖玲(51)Int.Cl.G01N1/30(2006.01)权利要求书1页说明书8页(54)发明名称染色试剂盒及使用方法(57)摘要本发明涉及染色试剂盒，包括含表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物以及DAB色原的第一试剂，能够提高DAB染色工作液的稳定性。本发明还涉及试剂盒的使用方法。CN110567785ACN110567785A权利要求书1/1页1.一种试剂盒，包括：第一试剂，含有表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物，以及DAB色原。2.权利要求1所述的试剂盒，其中，所述表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物的浓度为25μM至10mM，例如50μM至5mM；优选为0.25mM至10mM，例如0.5mM至5mM。3.权利要求1或2所述的试剂盒，进一步包括含DAB底物的第二试剂以及含DAB缓冲液的第三试剂。4.权利要求1或2所述的试剂盒，进一步包括含DAB底物和DAB缓冲液的第二试剂。5.权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述试剂盒是免疫组织化学试剂盒。6.一种提高DAB染色工作液稳定性的方法，包括将所述DAB色原与表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物接触。7.权利要求6所述的方法，其中，在所述DAB染色工作液中，所述表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物的浓度为1μM至400μM，例如2μM至200μM；优选为10μM至400μM，例如20μM至200μM。8.一种染色方法，包括：将含有表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物以及DAB色原的第一试剂与DAB底物和DAB缓冲液配制成工作液；将所述工作液加入至待染色样本并孵育；以及终止显色。9.权利要求8所述的方法，其中，所述第一试剂中所述表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物的浓度为25μM至10mM，例如50μM至5mM；优选为0.25mM至10mM，例如0.5mM至5mM。10.权利要求8所述的方法，经配制工作液在加入至待染色样本前放置了2天或更长时间，例如3天或更长时间，又例如7天或更长时间。2CN110567785A说明书1/8页染色试剂盒及使用方法技术领域[0001]本发明涉及病理学、分子生物学领域，具体涉及一种DAB染色试剂盒。背景技术[0002]免疫组织化学，简称免疫组化，是用免疫学的方法，将抗体标记上示踪物，来寻找检测组织细胞中的抗原，即组织细胞中的化学成分，所以也是用颜色的变化来判断组织细胞中的化学成分。偶尔也用标记抗原的方法检测组织内的抗体。该方法具有敏感性高、特异性强、定性、定量等优势，广泛用于检测组织石蜡切片、组织冷冻切片、细胞涂片、细胞印片和培养细胞中。[0003]原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。[0004]蛋白质印迹法，又称WesternBlot，是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用经标记的特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。[0005]在免疫组化、原位杂交和WesternBlot方法中，在反应后，要将无色的物质通过一定的化学反应转变呈现一定的颜色，以便能够在显微镜下观察。根据标记示踪物的不同，适用相应的显色系统。作为标记示踪物，目前常使用的辣根过氧化物酶(HRP)，其通常使用DAB作为供氢体，H2O2作为底物，最终使抗原-抗体结合的终产物呈棕黄色或棕褐色。HRP特异性底物为H2O2，在分解H2O2过程中，HRP与H2O2形成初级复合物，无电子供体时，反应不再继续进行；当电子供体存在时，反应以一定的速度形成第二种复合物，之后HRP催化H2O2已形成的中间型产物，迅速生成水，酶被还原，电子供体被氧化、聚合，再经氧化环化，最后形成吲哚胺多聚体，此多聚体进一步氧化、环化，形成苯乙肼聚合体。其终产物可直接在光镜下观察，也可经OsO4处理后，增加反应产物的电子密度，用于电镜观察。[0006]目前，传统使用的DAB染色液主要不足之处在于：由于DAB染色剂稳定性差，易在溶液中逐渐失去供氢能力导致最后染色失败，需要现配现用。