从细胞培养上清液和生物流体分离并纯化微泡的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112795533A(43)申请公布日2021.05.14(21)申请号202110013769.7A61K35/28(2015.01)(22)申请日2014.03.12A61P17/00(2006.01)A61P17/02(2006.01)(30)优先权数据A61P25/00(2006.01)61/778,5912013.03.13USA61P43/00(2006.01)(62)分案原申请数据G01N33/574(2006.01)201480026884.62014.03.12C12Q1/6886(2018.01)(71)申请人迈阿密大学地址美国佛罗里达州(72)发明人E·V·巴迪亚瓦斯A·Q·沙比尔S·C·戴维斯(74)专利代理机构北京市联德律师事务所11361代理人黄大正张来光(51)Int.Cl.C12N5/0775(2010.01)权利要求书1页说明书30页附图45页(54)发明名称从细胞培养上清液和生物流体分离并纯化微泡的方法(57)摘要本发明涉及医学、细胞生物学、分子生物学和遗传学领域。具体地，本发明提供从细胞培养上清液和生物液体分离并纯化微泡的方法。本发明还提供微泡的药物组合物，其用于促进或增强伤口愈合、刺激组织再生、改造疤痕组织、调节免疫反应、改变肿瘤细胞的生长和/或可动性、或改变正常细胞的生长和/或可动性。本发明还提供欲用作诊断试剂的微泡的组合物以及制备所述微泡的组合物的方法。CN112795533ACN112795533A权利要求书1/1页1.一种利用沉淀剂从生物流体分离和/或纯化微泡的方法，所述沉淀剂通过置换溶剂化的水从所述生物流体沉淀出微泡。2.一种分离的微泡的制剂，其促进或增强血管生成。3.一种分离的微泡的制剂，其促进或增强神经元再生。4.一种分离的微泡的制剂，其促进或增强细胞增殖。5.一种分离的微泡的制剂，其促进或增强细胞迁移。6.一种分离的微泡的制剂，其促进或增强伤口愈合。7.一种分离的微泡的制剂，其减少疤痕形成。8.一种分离的微泡的制剂，其减少皱纹形成。9.一种分离的微泡的制剂，其用于诊断疾病在患者中的存在和/或进展。10.如权利要求9所述的分离的制剂，其中，所述疾病是转移性黑色素瘤。2CN112795533A说明书1/30页从细胞培养上清液和生物流体分离并纯化微泡的方法[0001]分案信息[0002]本申请是2014年3月12日递交的申请号为201480026884.6、发明名称为“从细胞培养上清液和生物流体分离并纯化微泡的方法”的发明专利申请的分案申请。技术领域[0003]本发明涉及医学、细胞生物学、分子生物学和遗传学领域。具体地，本发明提供从细胞培养上清液和生物液体分离并纯化微泡的方法。本发明还提供微泡的药物组合物，其用于促进或增强伤口愈合、刺激组织再生、改造疤痕组织、调节免疫反应、改变肿瘤细胞的生长和/或可动性、或改变正常细胞的生长和/或可动性。本发明还提供欲用作诊断试剂的微泡的组合物以及制备所述微泡的组合物的方法。背景技术[0004]微泡是由许多(即使不是全部)体外和体内的细胞类型分泌的并且存在于诸如例如血液、间质液、尿液、唾液和眼泪等生物流体中。微泡是由细胞的原生质膜形成的包含脂质双层的囊泡并且在尺寸上是不均匀的，范围在约2nm至约5000nm。在本文中将形成微泡的细胞称为“宿主细胞”。微泡是囊泡的异质群体并且包括例如外皮层、微粒、微泡、纳米囊泡、脱落囊泡和膜颗粒。[0005]微泡在它们的膜表面显示出来自于它们的宿主细胞的膜蛋白质，并且还可以在微泡中含有来自于所述宿主细胞的分子，诸如例如mRNA、miRNA、tRNA、RNA、DNA、脂质、蛋白质或感染性颗粒。这些分子可以起因于或者是导入到所述宿主细胞中的重组分子。微泡在细胞间通讯中发挥关键作用，并且可以在体内局部或远侧发挥作用，通过与靶细胞融合、将微泡上和/或中的分子运输到所述靶细胞中而诱导细胞的改变。例如，微泡已经牵连到抗肿瘤逆转、癌症、肿瘤免疫抑制、转移、肿瘤‑基质相互作用、血管生成和组织再生。微泡还可以用来诊断疾病，因为已经证明它们携带了多种疾病的生物标志物，包括例如心脏病、HIV和白血病。[0006]尽管微泡较重要，但是以有用的量分离微泡并同时保存它们的结构和功能的完整性仍然是个问题。传统的工序采用超速离心以从样本中分离微泡。[0007]例如，美国专利7,807,438公开了一种用于分离丙型肝炎病毒的方法。该方法包含从感染了丙型肝炎病毒(HCV)的个体的血浆分离出称为外来体的颗粒并且从这些外来体颗粒提取RNA。[0008]在另一个例子中，美国专利申请US20030198642A1公开了来源于抗原呈递细胞中的富集了MHCII类的隔室的[外]来体……