蛋白共修饰DNA芯片及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113913944A(43)申请公布日2022.01.11(21)申请号202111182158.1(22)申请日2018.10.12(62)分案原申请数据201811191611.32018.10.12(71)申请人深圳市真迈生物科技有限公司地址518000广东省深圳市罗湖区清水河街道清水河一路116号深业进元大厦2座5楼、6楼(72)发明人高锦鸿赵智赵陆洋(51)Int.Cl.C40B40/10(2006.01)C40B40/06(2006.01)C12Q1/6837(2018.01)G01N33/68(2006.01)C12Q1/6874(2018.01)权利要求书2页说明书11页附图2页(54)发明名称蛋白共修饰DNA芯片及其制备方法(57)摘要本申请公开了一种蛋白共修饰DNA芯片及其制备方法。该蛋白共修饰DNA芯片包括具有表面的基底，所称的表面为修饰后的表面，所称的表面共价连接有蛋白和DNA。该蛋白共修饰DNA芯片，蛋白通过共价连接在表面，不仅具有原料来源广、综合成本低、易制备等优点，而且，通过共价键固定更牢靠，蛋白不容易解吸附，能够避免或减少由此带来的非特异吸附。CN113913944ACN113913944A权利要求书1/2页1.一种蛋白共修饰DNA芯片，其特征在于，所述芯片包括具有表面的基底，所述表面为修饰后的表面，所述表面共价连接有所述蛋白和所述DNA。2.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述蛋白为牛血清白蛋白；任选地，所述蛋白包含封闭的巯基。3.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述表面还连接有小分子修饰试剂，所述小分子修饰剂为分子量不大于1000道尔顿的化合物；任选地，所述小分子修饰剂选自牛磺酸、氨丙基磺酸、丝氨酸、谷氨酸和磷酸丝氨酸中的至少一种。4.一种制备蛋白共修饰DNA芯片的方法，其特征在于，所述芯片包括具有表面的基底和一条或多条通道，所述表面与所述通道连接，所述方法包括固定处理，包括往所述通道通入包含DNA和蛋白的固定液使所述固定液与所述表面接触一定时长，以使所述DNA和所述蛋白共价连接在所述表面。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述蛋白为牛血清白蛋白；任选地，所述表面为具有环氧硅烷的表面，所述DNA和所述蛋白均通过与所述环氧硅烷共价连接而固定在所述表面。6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，还包括弱钝化处理，包括往所述通道通入含有表面活性剂的弱钝化液替换所述固定液，使其与固定处理后的表面接触，以促进所述DNA和/或所述蛋白与所述表面的连接；任选地，所述表面活性剂为阳离子表面活性剂；任选地，所述表面活性剂选自十六烷基三甲基溴化铵、双十八烷基溴化铵、十六烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基溴化铵和四辛基溴化铵中的至少一种；任选地，所述弱钝化液中的所述表面活性剂的浓度为1‑25mmol/L；任选地，所述弱钝化液中的所述表面活性剂的浓度为10mmol/L；任选地，所述弱钝化液还包含蛋白，所述蛋白与所述固定液中包含的蛋白为同种蛋白；任选地，所述蛋白为牛血清白蛋白；任选地，所述弱钝化液还包含小分子修饰试剂，所述小分子修饰试剂能够与所述表面连接以形成抗非特异性吸附层，所述小分子修饰剂为分子量不大于1000道尔顿的化合物；任选地，所述小分子修饰剂选自牛磺酸、氨丙基磺酸、丝氨酸、谷氨酸和磷酸丝氨酸中的至少一种；任选地，所述弱钝化液中的所述小分子修饰试剂的浓度为15‑45mmol/L；任选地，所述弱钝化液中的所述小分子修饰试剂的浓度为30mmol/L；任选地，所述弱钝化处理包括使所述弱钝化液与所述表面于35℃‑40℃接触2h‑5h。7.根据权利要求4‑6任一项所述的方法，其特征在于，还包括钝化处理，包括往所述通道通入钝化液替换所述固定液或者所述弱钝化液，使其与固定处理或者弱钝化处理后的表面接触。8.根据权利要求4‑7任一项所述的方法，其特征在于，还包括巯基封闭处理，包括对固定处理后或者弱钝化处理后或者钝化处理后的表面上的巯基进行封闭；任选地，所述巯基封闭处理包括：往所述通道通入还原试剂替换所述固定液或者所述弱钝化液或者所述钝化液，以将所2CN113913944A权利要求书2/2页述表面上的二硫键还原为巯基，以及往所述通道通入巯基封闭试剂替换所述还原试剂，以封闭所述表面上的巯基；任选地，所述还原试剂选自三(2‑羧乙基)膦、三(3‑羟基丙基)膦、二硫苏糖醇和巯基乙醇中的至少一种；和/或所述巯基封闭试剂选自碘乙酰胺、碘乙酸、马来酰亚胺和环氧丙醇中的至少一种；任选地，还包括洗涤步骤，包括采用三种不同的溶液依次对固定处理、弱钝化处理或者钝化处理后的表面进行洗涤。9.一种蛋白共修饰DNA芯片，其特征在于，所述芯片通过权利要求4