一种绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷及其分离和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113135978A(43)申请公布日2021.07.20(21)申请号202110350739.5A61K36/424(2006.01)(22)申请日2021.03.31(71)申请人中国科学院兰州化学物理研究所地址730000甘肃省兰州市城关区天水中路18号(72)发明人杨军丽孟宪华王铖博(74)专利代理机构兰州智和专利代理事务所(普通合伙)62201代理人张英荷(51)Int.Cl.C07J71/00(2006.01)C07J73/00(2006.01)C07J17/00(2006.01)A61P39/00(2006.01)A61P25/28(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图8页(54)发明名称一种绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷及其分离和应用(57)摘要本发明提供了一种绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷化合物及其分离方法。实验表明，分离的8个达玛烷型三萜皂苷化合物均能显著延长小鼠抗常压密闭缺氧、亚硝酸钠缺氧的时间，降低急性缺氧的死亡率，具有较好的抗缺氧作用；能显著延长小鼠在转棒上掉落的时间，延长小鼠负重游泳时间，具有较好的抗疲劳作用；低氧会导致小鼠的认知功能障碍，通过水迷宫实验发现绞股蓝活性部位预处理会在一定程度上保护小鼠的学习认知能力，因此可用于制备抗疲劳、抗耐氧缺、改善学习认知药物中。CN113135978ACN113135978A权利要求书1/2页1.绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷化合物，其结构式如下：。2.如权利要求1所述绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷化合物的分离方法，包括以下步骤：（1）将干燥绞股蓝粉碎，用其5‑20倍量水或70%乙醇‑水加热回流提取3次，每次1‑2小时，提取液合并，浓缩至无醇味，用大孔吸附树脂洗脱，得到绞股蓝活性部位；（2）将绞股蓝活性部位溶解在水中，分别用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到乙酸乙酯相、正丁醇相；（3）乙酸乙酯相用硅胶柱分离，氯仿‑甲醇混合液梯度洗脱，得到7个部位Fr.A~Fr.G；其中Fr.D液相分离，依次得到化合物1、化合物2、化合物3；Fr.G液相分离，得到化合物8；氯仿‑甲醇混合液中，氯仿与甲醇的体积比为70:1~10:1；（4）正丁醇相溶解在1MH2SO4的水溶液中，加热回流6小时，反应结束后用NaHCO3饱和水溶液中和，浓缩液用硅胶柱分离，氯仿‑甲醇梯度洗脱，得到3个部位Fr.A~Fr.C；氯仿与甲醇的体积比20:1~2:1；其中Fr.B用C18反相硅胶柱分离，甲醇/水混合液梯度洗脱，得到5个部位Fr.1~Fr.5；甲醇/水混合液中，甲醇与水的体积比为50:50~100:0；部位Fr.1液相分离，得到化合物6；部位Fr.2用硅胶柱分离，氯仿‑甲醇梯度洗脱，得到部位Fr.2.1；氯仿与甲醇的体积比为20:1~2:1；Fr.2.1液相分离，得到化合物7；部位Fr.3用硅胶柱分离，氯仿‑甲醇梯度洗脱，得到部位5个部位Fr.3.1~Fr.3.5；氯仿与甲醇的体积比40:1~10:1；Fr.3.1液相分离，得到化合物4；部位Fr.4液相分离，得到化合物5。2CN113135978A权利要求书2/2页3.如权利要求2所述绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷化合物的分离方法，其特征在于：步骤（3）中，Fr.D的液相分离条件：甲醇/水=85/15为流动相，流速为10mL/min；色谱柱型号为DaisogelC18柱，色谱柱长度×直径为250mm×20mm。4.如权利要求2所述绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷化合物的分离方法，其特征在于：步骤（3）中，Fr.G液相分离条件：甲醇/水=88/12为流动相，流速为10mL/min；色谱柱型号为MegresC18柱，色谱柱长度×直径为250mm×20mm。5.如权利要求2所述绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷化合物的分离方法，其特征在于：步骤（4）中，部位Fr.1液相分离得到化合物6的条件：甲醇/水=79/21为流动相，流速为10mL/min；色谱柱型号为MegresC18柱，色谱柱长度×直径为250mm×20mm。6.如权利要求2所述绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷化合物的分离方法，其特征在于：步骤（4）中，Fr.2.1液相分离得到化合物7的条件：甲醇/水=80/20为流动相，流速为10mL/min；色谱柱型号为DaisogelC18柱，色谱柱长度×直径为250mm×20mm。7.如权利要求2所述绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷化合物的分离方法，其特征在于：步骤（4）中，其中Fr.3.1液相分离得到化合物4的条件：甲醇/水=91/9为流动相，流速为10mL/min；色谱柱型号为MegresC18柱，色谱柱长度×直径为250mm×20mm。8.如权利要求2所述绞股蓝活性成分达玛烷