熊果酸提取的研究工艺.pdf

熊果酸提取的研究工艺刘影练丽秋浙江万里学院生物与环境学院生物技术063指导教师：汪财生高级实验师熊果酸(Ursolciacdi)又名乌苏酸、乌索酸属于有机三萜酸。熔点254-257摄氏度是羟基酸易溶于熊果酸溶于甲醇、乙醇、丁醇、丁酮、氯仿、丙酮等不溶于水及石油醚。味苦有一定的光学活性比旋光度59（c=0.3cyridine）作用：近来研究还发现熊果酸是很好的免疫增强剂具有较强的免疫增强作用和抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成、抗将血清软氨酶、抗糖尿病等作用且毒性小。所以熊果酸有望成为低毒有效的新型抗癌药。另外还具有明显抗氧化功能因而医药和化妆品原料、食品的乳化剂具有抗糖尿病作用。熊果酸在药用植物中分布广泛尤以枇杷叶中含量较高。枇杷叶是传统的常用中药具有止咳、清肺和胃、降气化痰之功效。研究表明枇杷叶中含皂苷、苦杏仁苷、熊果酸、齐墩果酸、丁香素、枸橼酸盐、鞣质、维生素B1和维生素C等。通过提取、分离、纯化等步骤制得熊果酸工艺简便易行为熊果酸的工业化生产和综合利用枇杷叶资源提供了参考依据。1仪器与试剂1.1仪器ES-C600天平(湘仪天平仪器厂);超声波振荡仪(上海Branson);RE-52旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);电热恒温水浴锅(北京医疗设备厂意成公司);TG16-Ⅱ台式离心机(长沙平凡仪器仪表有限公司);高效液相色谱仪(液相色谱仪用HPagilent1100检测器用紫外可见检测器SEPU色谱工作站3000)。1.2试剂95%乙醇(武汉宏大化学试剂厂生产分析纯符合GB679-94标准);甲醇(天津市科密欧化学试剂开发中心提供色谱纯);石油醚(60~90℃天津市科密欧化学试剂开发中心提供);活性炭;熊果酸、齐敦果酸(中国药品生物制品检定所);枇杷叶干燥粉碎备用;水为蒸馏水、离子水。2提取与纯化方法2.1提取称取枇杷叶粉末[过20目筛100g置于烧杯中用8倍量95%乙醇超声提取3次每次30min。合并3次提取液过滤除去残渣减压回收乙醇得浸膏。20目筛趁热过滤石油醚24h浸提枇杷叶、粉碎、烘干乙醇回流提取溶剂浓缩得浸膏NaOH溶液水洗无水乙醇活性炭热乙醇结晶洗出液（无色)溶解过滤放冷静置白色片状加热回流脱色反复洗残渣热乙醇重结晶熊果酸粗品高效液相溶解2.2纯化将浸膏依次用石油醚、1%氢氧化钠水溶液、水洗至洗出液近无色烘干。再用无水乙醇加热溶解加活性炭回流脱色20min滤过。用热乙醇反复洗涤残渣合并滤液及洗液蒸去部分乙醇放冷静置得白色片状结晶;过滤滤饼加入乙醇加热煮沸趁热过滤滤渣反复用乙醇重结晶得白色针状结晶。图1.提取熊果酸的原则工艺流程2.2.1大孔吸附树脂层析法大孔吸附树脂是一类不含离子交换基团的交联聚合物理化性质稳定不溶于酸、碱及有机溶剂对有机物有浓缩、分离作用且不受无机盐及离子、低分子化合物的干扰。它的吸附作用通过表面吸附、表面电性