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熊果酸提取的研究工艺
刘影练丽秋
浙江万里学院生物063与环境学院生物技术
指导教师：汪财生高级实验师

熊果酸(Ursolciacdi)又名乌苏酸、254-257摄氏度，是乌索酸，属于有机三萜酸。熔点
羟基酸，易溶于熊果酸溶于甲醇、乙醇、丁醇、丁酮、氯仿、丙酮等，不溶于水及石油醚。
味苦，有一定的光学活性，比旋光度59（c=0.3，cyridine）作用：近来研究还发现熊果酸是
很好的免疫增强剂,具有较强的免疫增强作用和抗致癌、抗F9畸胎瘤细胞分化和促癌、诱导
抗血管生成、抗将,且毒性小。所以熊血清软氨酶、抗果酸有望糖尿病等成为低作用毒有效
的新型抗癌药。另具外还具有明显抗氧化功能，有因而医药和化妆品原料、食品的乳化剂，
抗糖尿病作用。
熊果酸在药用植物中分布广泛,尤以枇杷叶中含量较高。枇杷叶是传统,具有的常用中药
止咳、清肺和胃、,枇杷叶中含皂苷、降气化痰之功效苦杏仁苷。研究表、熊果明酸、齐墩
果酸、丁香素、枸橼酸盐、B1和维生素C等。通过提取、分离、骤鞣质、维生素纯化等步
制得熊果酸,工艺简便易行,为熊果酸的工业化生产和综合利用枇杷叶资源提供了参考依据。
1仪器与试剂
1.1仪器ES-C600天平(湘仪);超声天平(上海Branson);RE-52波振仪旋转器荡厂仪蒸发仪
(上海亚荣生);电热恒温水(北京医疗设化仪器);TG16-Ⅱ台式离心机浴锅(厂长备厂意成公司
沙平凡仪);高效液相(器仪液相色谱HPagilent表1100,色谱检测器用有限仪仪公司用紫外可
见检测器,SEPU色谱工作站3000)。
1.2试剂95%乙醇(武汉宏大化学试剂厂生产,分析纯,符合GB679-94标准);甲醇(天津市科
密欧化学试剂开发中心提供,色谱纯);石油醚(60~90℃,天津市科密欧化学试剂开发中心提供);
活性炭;熊果酸、(中国药品生物制品检定所齐);枇杷叶,干燥敦果酸,粉碎备用;水为蒸馏水、离
子水。
2提取与纯化方法
2.1提取称取枇杷叶粉末[过20目筛,100g置于烧杯中,用8倍量95%乙醇超声提取3次,
每次30min。合并3次提取液,过滤除去残渣,减压回收乙醇,得浸膏。

20目筛趁热过滤石油醚24h浸提
枇杷叶、粉碎、烘干乙醇回流提取溶剂浓缩得浸膏
NaOH溶液水洗

无水乙醇活性炭热乙醇结晶
洗出液（无色)溶解过滤放冷静置白色片状
加热回流脱色反复洗残渣
热乙醇
重结晶熊果酸粗品高效液相
溶解

2.2纯化将浸膏依次用石油醚、1%氢氧化钠水溶液、水洗至洗出液近无色,烘干。再用无
水乙醇加热溶解,加活性炭回流脱色20min,滤过。用热乙醇反复洗涤残渣,合并滤液及洗液,
蒸去部分乙醇,放冷,静置,得白色片状结晶;过滤,滤饼加入乙醇,加热煮沸,趁热过滤,滤渣反复
用乙醇重结晶得白色针状结晶。

图1.提取熊果酸的原则工艺流程
2.2.1大孔吸附树脂层析法
大孔吸附树脂是一类不含离子交换基团的交联聚合物，理化性质稳定，不溶于酸、碱
及有机溶剂，对有机物有浓缩、分离作用且不受无机盐及离子、低分子化合物的干扰。它的
吸附作用通过表面吸附、表面电性或形成氢键而完成。大孔吸附树脂与有机物的作用力主要
为范德华引力与氢键。首次采用大孔吸附树脂富集柱和大孔吸附树脂纯化柱串联的方法分离
纯化熊果酸。富集柱优先吸附熊果酸以除去大量杂质，使熊果酸的纯度从28.05%提高到
85.0%以上，再用纯化柱除去熊果酸中的部分杂质，使熊果酸的纯度进一步提高到95.0%以
上。分步洗脱富集柱时发现，50%以下的乙醇溶液可以有效除去杂质，而熊果酸则可用pH
为10的80%乙醇溶液解吸，解吸率为98.0%以上。在pH为10的80%乙醇溶液中，纯化柱
对杂质的吸附率为98.76%，而对熊果酸的吸附率仅为0.05%。
洗脱剂组合，即水一20%乙醇一50%乙醇一52%乙醇一80%乙醇(pH=10)，每一段洗
脱剂的体积分别为:50，50，150，100，100ml。将富集柱熊果酸的解吸过程与纯化柱杂质的
吸附过程串联即可达到纯化熊果酸的目的。富集柱和纯化柱再生容易，经过再生后，树脂的
吸附率均可恢复到98%以上;大孔吸附树脂技术以其独特的优势广泛用于中草药化学成分的
分离纯化，主要用于水溶性物质的分离，如水溶性生物碱、黄酮类化合物、昔类化合物、皂
昔类化合物、多酚类或酸性化合物、糖类、维生素、色素等。
2.3高效液相色谱法
高效液相色谱用于熊果酸分离测定具有快速、高效、操作方便等优点。用于熊果酸分析
的高效液相色谱柱的固定相为C18，即十八烷基键合相硅胶，流动向以甲醇一水体系为主。
甲醇与水的比例变化较大，从80:20~97:3不等。采用甲醇一磷酸盐缓冲液为流动相，熊果
酸进样量在0.251一10.0409呈良好的线性关系，最小检出限(信噪比)3)为0.150