发酵工艺优化及发酵液后处理的研究.pdf

内蒙古农业大学硕士学位论文乳糖酶基因在毕赤酵母中的表达鉴定、发酵工艺优化及发酵液后处理的研究姓名：苏全申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：周雨霞;张伟20070501摘要．半乳糖苷半乳糖水解酶．猤通常被称为乳糖酶①８妹缚山樘撬獬晌0肴樘怯肫咸烟牵币簿哂半乳糖苷的转移作用。肴樘擒彰钢饕Sτ迷谏腿樘侨橹破芬约盎航饩蠖数亚洲人食用乳制品时造成的乳糖吸收不良和乳糖不耐受的问题。但目前在我国乳糖酶的应用还未得到广泛推广主要原因就是乳糖酶产量低销售价格过高应用成本昂贵不能满足食品和乳制品工业的需要。而基因工程技术的发展为研制出产量高、酶学性质优良、工艺简便、成本低、更适合食品工业生产的乳糖酶提供了有效的途径。本试验利用基因工程技术构建真核表达载体甤⑶依帽铣嘟湍表达系统成功的高效分泌表达了来源于亮白曲霉的乳糖酶表达量达：Ｔ诖嘶础上对高表达菌株的插入位点进行了鉴定结果显示。初步认为整合方式相同并且与。整合方式不同这为寻找高表达的菌株与插入位点之间的关系为获得高表达菌株奠定理论基础。同时在小试水平对乳糖酶的发酵工艺进行了研究和优化成功的摸索出乳糖酶发酵的最佳条件为％接种量温度琾．迳な奔甲醇添加量由控制诱导方式首先采取了葡萄糖一甲醇混合物进行过渡期随后是甲醇诱导的方式这将为乳糖酶大规模工业化生产提供借鉴。最后根据乳糖酶发酵液中颜色较深盐浓度高等特点和后期纯化工艺的要求选择了膜分离技术来处理发酵液其中主要从微滤提取、超滤浓缩两步操作过程对酶活性的影响进行了研究就超滤而言温度℃操作压力小于浓缩倍数倍时酶活损失最少膜最容易清洗。关键词：乳糖酶；巴斯德毕赤酵母；聚合酶链式反应；印迹杂交；发酵；膜技术．省辳蛐蓿琣鵥伍’．．薄⒁黨琓緎Ⅱ．騦甌．甃“瑂礶痬畉甀。瑃甌琱籧瓵．琣痗痑。畃痬甌猻—础描；篖缸：；咖：删．；；：．．騠畆插图和附表清单．图点勰酶切基因组后电泳图⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．图屁胡暄酶切基因组后电泳图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯质粒构建过程⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．重组质粒双酶切回收缬就肌盖性靥宓缬就肌以蚅为引物缬就肌基因组除暗缬就肌基因组除蟮缬就肌．图阳性对照回收电泳图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯盖谢蜃閤馄盖谢蜃閤馄．图发酵流程图．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．图溶氧变化图．⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．图湿重与时间的关系变化图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．“岫微滤操作流程图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．图膜通量随过滤时间的变化图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．表铣嘟湍副泶锼拗骶．表∑克街刈榻湍副泶锏娜樘敲富钚圆舛ń峁．表迮ǘ鹊牟舛ń峁Ⅲ历棚ッ盖屑╬缬就肌盖兄柿