用于细胞群体和单细胞的单分子分离系统及其方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112415184A(43)申请公布日2021.02.26(21)申请号202010846714.XC12N15/10(2006.01)(22)申请日2020.08.21C07K1/14(2006.01)(30)优先权数据62/922,6572019.08.22US(71)申请人香港科技大学地址中国香港九龙清水湾(72)发明人黄平波赵琦睿(74)专利代理机构北京世峰知识产权代理有限公司11713代理人康健王思琪(51)Int.Cl.G01N33/53(2006.01)G01N33/68(2006.01)C12M1/00(2006.01)C12N5/00(2006.01)权利要求书3页说明书24页附图10页(54)发明名称用于细胞群体和单细胞的单分子分离系统及其方法和用途(57)摘要本发明涉及用于分离单细胞、捕获所述细胞内的所选猎物生物分子以及使用灵敏的测定方法检测所述猎物生物分子的系统和方法。本文还描述了能够以低的检测限度检测所选细胞的所选猎物生物分子的官能化衬底和组合物。CN112415184ACN112415184A权利要求书1/3页1.一种系统，其包括：包含多个微米大小的特征的玻璃衬底、多个经抗体包被的珠粒、针对诱饵生物分子的多种一级抗体、多种诱饵分子、多种靶猎物生物分子和针对所述靶猎物生物分子的多种一级抗体。2.根据权利要求1所述的系统，其中所述多个经抗体包被的珠粒包含针对针对所述靶诱饵生物分子的所述一级抗体的多种二级抗体。3.根据权利要求1所述的系统，其中所述多个经抗体包被的珠粒包含针对所述靶诱饵生物分子的多种一级抗体。4.根据权利要求1所述的系统，其进一步包含一种或多种类型的细胞。5.根据权利要求4所述的系统，其中所述细胞包含一种或多种类型的靶猎物生物分子。6.根据权利要求1所述的系统，其中所述多个经抗体包被的珠粒在所述多个微米大小的特征内。7.根据权利要求4所述的系统，其中所述多个细胞位于所述多个微米大小的特征中。8.根据权利要求1所述的系统，其进一步包含细胞裂解缓冲剂。9.根据权利要求8所述的系统，其中所述细胞裂解缓冲剂包括非变性洗涤剂。10.根据权利要求1所述的系统，其中所述多个经抗体包被的珠粒包含结合与诱饵生物分子结合的所述多种一级抗体的二级抗体。11.根据权利要求1所述的系统，其中所述多个微米大小的特征包括一系列孔，所述孔中的每一个具有约15微米到约45微米的直径，各孔的中心之间的距离为约100微米到约5000微米范围，和各孔的深度为约25微米到约150微米。12.根据权利要求11所述的系统，其中所述一系列孔的所述直径为约30微米。13.根据权利要求11所述的系统，其中各孔的中心之间的所述距离为约150微米。14.根据权利要求11所述的系统，其中各孔的深度为约75微米。15.根据权利要求4所述的系统，其中多个细胞包括平均直径小于孔的平均直径的细胞。16.根据权利要求15所述的系统，其中所述多个细胞包括平均直径为约30微米的细胞。17.根据权利要求1所述的系统，其中所述多个经抗体包被的珠粒进一步包含磁性珠粒。18.根据权利要求17所述的系统，其中所述磁性珠粒包含氧化铁芯。19.根据权利要求17所述的系统，其进一步包含磁体。20.根据权利要求4所述的系统，其中所述多种靶猎物生物分子包括在所述细胞的细胞膜中发现的分子。21.根据权利要求4所述的系统，其中所述多种靶猎物生物分子包括在所述细胞的细胞质中发现的分子。22.根据权利要求1所述的系统，其中将所述多个微米大小的特征直接蚀刻到所述玻璃衬底中。23.根据权利要求1所述的系统，其中所述多个微米大小的特征由聚二甲基硅氧烷(PDMS)形成。24.根据权利要求23所述的系统，其中所述衬底包括固化的PDMS。25.根据权利要求1所述的系统，其中所述玻璃衬底是厚度为0.085mm到0.64mm的玻璃2CN112415184A权利要求书2/3页盖片。26.根据权利要求25所述的系统，其中所述玻璃衬底被配置为能通过TIRF(全内反射显微镜术)测量。27.根据权利要求1所述的系统，其中所述诱饵生物分子和猎物生物分子独立地选自：蛋白质、DNA、RNA、mRNA、tRNA、cRNA、抗体、抗体片段、ScFv、肽和小分子。28.根据权利要求27所述的系统，其中所述DNA或RNA进一步经生物素修饰。29.一种系统，其包括包含多个微米大小的特征的玻璃衬底、结合诱饵生物分子的多种第一捕获剂、多种诱饵生物分子、多种猎物生物分子、结合所述猎物生物分子的多种第二捕获剂，其中结合诱饵分子的所述多种第一捕获剂进一步包括磁性珠粒。30.根据权利要求29所述的系统，其中将所述诱饵生物分子连接到荧光团。31.根据权利要求29所述