食品中菌落总数的测定实验.pdf

..食品中菌落总数的测定实验一、实验目的：了解稀释平板计数的原理掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后其中的微生物充分分散为单个细胞取一定量的稀释液接种到平板上经过培养由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞所以长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果现在已倾向使用菌落形成单位(colony-formingunitscfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。该计数法的缺点是操作较繁结果需要培养一段时间才能取得而且测定结果易受多种因素的影响但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息所以被广泛用于生物制品检验以与食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测三、试剂和材料1.仪器恒温培养箱：（36℃±1℃30℃±1℃。）均质器或振荡器1/3..无菌吸管：1ml（0.01ml刻度）、10ml（0.1ml刻度）或微量移液器与吸头无菌锥形瓶：容量250ml、500ml、无菌培养皿：直径90mm菌落计数器2.样品1）平板计数琼脂（platecountagarPCA）培养基：蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000ml、pH7.0±0.2。将所有成分加于蒸馏水中煮沸溶解调节pH。分装试管或锥形瓶121℃高压灭菌15min。注：用平板计数琼脂称取23.5g于1000ml蒸馏水中加热煮沸至完全溶解121℃高压灭菌20min冷却至45~47℃左右备用。2）无菌生理盐水：氯化钠（NaCl）5.875g蒸馏水(纯净水)500ml称取5.875ｇNaCl溶于500ml蒸馏水中121℃高压灭菌20min。3.器材100ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、天平、称样瓶、记号笔、酒精灯等。四、操作与实验步骤1.样品的稀释：25g(ml)样品+225ml稀释液均质。10倍系列稀释。每递增稀释一次换用1次1ml无菌吸管或吸头。（注意吸管或吸头尖端不要触与稀释液面）选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液各取1ml分别加入无菌培养皿。吸取1ml空白稀释液作空白对照。每皿中加入15ml～20ml平板计数琼脂培养基并转动平皿使其混合均匀。2/3..2.培养：待琼脂凝固后将平板翻转36±1℃培养48h±2h。水产品30±1℃培养72h±3h。（如果有弥漫生长的菌落时可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4ml）凝固后翻转平板。）3.菌落计数：记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunitsCFU）表示。五、计算公式:式中：N——样品中菌落数；∑C——平板（含适宜围菌落数的平板）菌落数之和；n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d——稀释因子（第一稀释度）。六、实验数据：10-1310-21空白00NaCl水10-1010-21琼脂03/3