【精选】生化药物分析及生物检定技术.ppt

定义：指运用生物化学的理论、方法和技术从动、植物等生物体中提取分离的天然活性物质以及这些物质及其衍生物的化学合化、半合成和现代生物技术制得的产品。常测定：氨基酸及其衍生物、药用活性多肽、药用蛋白、药用酶、辅酶、核酸及其降解产物和衍生物、多糖和脂类药物、基因工程DNA重组药物等。优点：易被机体吸收针对性强疗效可靠毒副作用小营养价值高等。一、生化药物分析的特点1、分子量不确定性(1)只有氨基酸、核苷酸、辅酶、甾体激素等化学结构明确的小分子化合物分子量确定。(2)大多分子量不确定结构不确定因此生化药物常需进行纯度及分子量测定。2、分析项目的特殊性(1)除采用理化法分析外尚需用生物检定法进行检定以证实其生物活性(2)因易引入杂质常需做热源、热敏、异常毒性、安全性试验(3)多用含量测定表示主药含量但酶类需进行效价/酶活力测定来表示有效成分含量。3、分析方法的多样性如：理化、生化、生物检定法等。二、生化药物分析的方法1、鉴别(1)化学反应法(2)UV(3)酶法：如尿激酶-蛋白水解酶(4)电泳法：如肝素-糖凝胶电泳法(5)生物法：利用生物体进行试验2、杂质检查(1)一般杂质(2)特殊杂质3、安全性检查(1)热原检查：由微生物所分泌的某一种代谢产物一般以为是内毒素能使恒温动物体温升高。方法：家兔法/鲎试剂(2)异常毒性试验用一定剂量药物按指定的操作方法和给药途径给规定体重的试验动物观察其急毒反应(是否死亡)是一个限度试验。异常毒性试验出现：主要取决于供试品在生产中是否引入可发生异常毒性杂质。(3)过敏试验检异性蛋白试验----引起多种过敏反应轻:皮肤产生红斑/丘疹过敏重:窒息、发绀、血管神经性水肿血压降低、休克、死亡。(4)降压物质检查指药物中含有能导致血压降低的杂质包括组胺、类组胺或其他物质。来源：用动物脏器/组织制备时在正常组织中存在。方法：猫/狗血压法检药物中所含降压物质。(5)无菌检查对药物及敷料是否染有活菌的检查。由于许多生化药物不能高温灭菌故检查此项。4、含量/效价测定表示方法：(1)含量百分比：适用于化学结构明确小分子/经水解后变成小分子药物。(2)生物效价/酶活力单位表示适于酶类、蛋白质类。常用方法：(1)酶法(2)电泳法(3)生物检定法(4)理化法(1)酶法①酶活力测定法：a.终点法：单酶反应定量法指示酶反应偶联定量法b.取样测定法c.连续测定法②酶分析法：a.动力学分析法b.总变量分析法(2)电泳法①自由界面电泳法②高效毛细管电泳法③区带电泳法a.纸电泳法b.醋酸纤维素薄膜电泳法c.聚丙烯酰胺凝胶电泳法d.十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳法(3)生物检定法是利用药物对生物体的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。以药物的药理作用为基础生物统计为工具运用特定的实验设计通过供试品和相应的标准品或对照品在一定条件下比较产生特定生物反应的剂量比例来测得供试品的效价。(4)理化法①重量法a.提取法b.挥发法c.沉淀法②测定法③比色法④UV⑤高效凝胶过滤色谱法a.分离根据有效粒径b.分离在固定比例水液中c.活性蛋白可回收⑥高效离子交换色谱法a.分离根据离子化浓度b.分离盐浓度增大的梯度洗脱法c.分离在阳/阴离子交换间呈现差异大d.柱效中等并具高质量的活性回收三、生化药物分析进展总体向理化/仪器分析发展如：GC、HPLC、UV、TR、质谱、磁共振、超离技术、放射免疫、酶试剂、酶电极检测等。另应用细胞培养对生化药的活力和效价检测。单克隆体免疫分析技术及基因分析技术提高检测限量和灵敏度。生物检定技术一、定义二、检查方法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法一、平皿法二、薄膜过滤法二、薄膜过滤法二、薄膜过滤法生物检定技术1．仪器与用具2．试剂3．培养基及培养基适用性检查3．培养基及培养基适用性检查3．培养基及培养基适用性检查3．培养基及培养基适用性检查3．培养基及培养基适用性检查3．培养基及培养基适用性检查3．培养基及培养基适用性检查4．阳性对照试验及阴性对照试验5．操作前准备5．操作前准备6．检查方法6．检查方法6．检查方法6．检查方法6．检查方法6．