【精选】工业微生物育种诱变剂.ppt

第五章工业微生物育种诱变剂通过人为的方法利用物理、化学因素处理微生物以引起突变这一过程称为诱发突变。诱变剂种类第一节物理诱变剂1.1物理诱变剂的种类1.2物理诱变剂的生物学效应1.2物理诱变剂的生物学效应1.2物理诱变剂的生物学效应切尔诺贝利核爆炸2011年3月11日爆发的9.0级特大地震影响日本福岛核电站反应堆发生氢气爆炸1.3辐射引起生物效应的因素1.4非电离辐射——紫外线1.4非电离辐射——紫外线1.4非电离辐射——紫外线1.4非电离辐射——紫外线1.4非电离辐射——紫外线1.4非电离辐射——紫外线1.4非电离辐射——紫外线1.5电离辐射X射线波长是0.06~136纳米X射线一般由X光机产生。γ射线的波长是0.006~1.4纳米γ射线来自放射性元素钴、镭或氡等。中子可以从回旋加速器、静电加速器或原子反应堆中产生快中子具有的能量最高为0.2~10MeV1.5电离辐射1.5电离辐射1.5电离辐射1.5近年来发展的新型诱变剂化学诱变剂也可借用电离辐射的方法。试管中所盛液体不能过多否则氧气供应不足诱变效应和重复性都比较差。电离辐射的穿透能力比较强可以穿透玻璃等材料而紫外线则不能穿透普通的玻璃诱变时必须打开盖子。第二节化学诱变剂2.1化学诱变剂的一般特点在DNA复制过程中取代正常碱基整合进DNA分子它们产生异构体的频率高出现碱基错配的概率也高2.2碱基类似物352.2碱基类似物372.3烷化剂2.3.1烷化剂2.3.1烷化剂2.3.1烷化剂2.3.1烷化剂1.取新鲜的斜面用一定pH值的缓冲液或Tris缓冲液洗下细菌制成菌悬液。如果采用细菌细胞或丝状菌孢子（真菌或放线菌）须进行前培养可用有关培养基代替以上缓冲液孢子培养时间控制在大部分孢子处在萌动阶段经离心、洗涤用缓冲液制成悬液浓度约在106-107mL-1；2.配制NTG母液：由于NTG不溶于水配制需加助溶剂甲酰胺或丙酮少许然后加缓冲溶液其比例为9：1（缓冲溶液9ml：NTG丙酮溶液1ml）一般NTG母液浓度配成1mg/ml。使用时取母液0.2ml加菌悬液1.8mlNTG最后处理浓度为100μg/ml。一般处理浓度随菌种不同而异通常细菌为100—1000μg/ml而放线菌、真菌孢子为1000—3000μg/ml。4.终止反应。用冷的生理盐水稀释到50倍以上或在低温下进行离心洗涤除去药液加无菌水使沉淀悬浮并作成一定稀释度分离于平皿。NTG是一种强烈的致癌物质操作时要带橡皮手套穿工作服带口罩用称量瓶称量最好在通风橱中进行。凡接触过NTG的器皿必须及时、单独处理例如用自来水大量冲洗或用1—2mol/L的NaOH或2%的Na2S2O3浸泡过夜洗净。2.3.1烷化剂2.3.2脱氨剂(以亚硝酸为例)2.3.2脱氨剂(以亚硝酸为例)2.4移码诱变剂2.5羟化剂2.5羟化剂2.5羟化剂2.6金属盐类2.7其他化学诱变剂2.8重视化学诱变剂的操作安全诱变剂第三节生物诱变剂3.1噬菌体3.2基因定点诱变3.3生物诱变剂的主要诱变方式3.3生物诱变剂的主要诱变方式3.3生物诱变剂的主要诱变方式3.2基因定点诱变课堂讨论思考题今日话题