【精选】实验三霉菌、放线菌及土壤中微生物的分离纯化.ppt

实验三放线菌、霉菌的形态观察及微生物的分离纯化一、实验目的二、实验原理⑴营养菌丝：又叫初级菌丝体或一级菌丝体匍匐生长于培养基内主要生理功能是吸收营养物故亦称基内菌丝。营养菌丝一般无隔膜直径0.2—0.8µ但长度相差很大短的小于100µ长的可达600µ以上有的无色素有的产生黄、橙、红、紫、兰、绿、褐、黑等不同色素若是水溶性的色素还可透入培养基内将培养基染上相应的颜色如果是非水溶性（脂溶性）色素则使菌落呈现相应的颜色因此色素是鉴定菌种的重要依据。⑵气生菌丝：又称二级菌丝体。营养菌丝体发育到一定时期长出培养基外并伸向空间的菌丝为气生菌丝。⑶孢子丝：当气生菌丝体发育到一定程度其上分化出可形成孢子的菌丝即孢子丝又名产孢丝或繁殖丝。放线菌最突出的特性之一是产生大量的、种类繁多的抗生素根据估计全世界共发现4000多种抗生素其中绝大部分是由放线菌产生的。2、霉菌：霉菌是一些“丝状真菌”的统称不是分类学上的名词。凡是在基质上长成毛状、棉絮状或蜘蛛网状的丝状真菌统称霉菌。霉菌形态比细菌、放线菌复杂个体比较大具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。因此在观察是要注意菌丝的直径大小菌丝体有无隔膜营养菌丝有无假根无性繁殖或有性繁殖时形成的孢子是哪一种孢子是怎样着生的。由于霉菌的菌丝较粗大而且孢子容易飞散如将菌体置于水中容易变形故观察时状不用水浸法制片而将菌体置于乳酸石炭酸棉兰染液中使细胞不易干燥并有杀菌作用。根霉三、实验材料四、实验步骤2、霉菌：在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉兰→用解剖针取少许霉菌于染色液中→挑开菌丝→盖上盖玻片片→镜检。观察黑曲霉菌丝分隔情况和分生孢子着生情况（着重辨认分生孢子梗、足细胞和分生孢子）：观察根霉菌丝情况和子囊孢子情况（着重辨认孢子囊、包囊梗、假根）：五、实验结果实验(二)、从土壤中稀释分离微生物一、实验目的：学习微生物稀释平板计数及划线分离技术二、实验原理:采用适宜(选择)培养基和培养条件或加入某种抑制剂有利于目标微生物的生长从而分离获得目标微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法在固体培养基上形成单个菌落依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数目（二）悬液稀释：方法见下图：（三）倒固体琼脂培养基平板：分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（200ml／瓶）熔化后加制霉菌素1ml后倒平板。分离真菌的同学取一瓶马丁-孟加拉红培养基（200ml／瓶）熔化后冷至50℃后加链霉素2ml倒平板。（四）悬液涂布(演示):无菌操作(从稀至浓将菌液涂布均匀)采用10－210－310－4稀释液涂布马丁－孟加拉红平板；采用10－310－410－5稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板每人用剩下的1个平板做划线分离从三角瓶中取土壤悬液作划线分离（演示）（五）培养：每个同学把平板用报纸包好（每个平板方向一致）写上班级和姓名皿底朝上置于培养箱培养(温度?!)。（六）检查结果平板涂布划线分离方式结果分析:1.我所涂平板种类：（牛肉膏或马丁氏）2.计数：牛肉膏平板取单菌落数目在30～300个左右的稀释度来计数马丁氏平板取单菌落数目在10～100个左右的稀释度来计数3.我所计数的平板稀释度是：单菌落数目：、、。4.计算：活菌数目/每克土壤＝（计算过程）＝个/每克土壤5.对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析实验报告从土壤中稀释分离微生物的原理、方法、步骤。2．思考题(1)为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落计数准确需要掌握哪几个关键?为什么?(3)试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点及应用。(4)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时你认为问题出在哪里?(5)用倒平板法和涂布法计数其平板上长出的菌落有何不同?为什么要培养较长时间(48h)后观察结果?本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！所用器皿自己洗净！请第三组同学留下值日下周再见！