一种测定银杏叶提取物中萜类内酯含量的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109406676A(43)申请公布日2019.03.01(21)申请号201811509015.5(22)申请日2018.12.04(71)申请人江苏得乐康生物科技有限公司地址222342江苏省连云港市东海县平明镇驻地西侧平明(72)发明人崔升官陈金平(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称一种测定银杏叶提取物中萜类内酯含量的方法(57)摘要本发明公开了一种测定银杏叶提取物中萜类内酯含量的方法，属于化学检测领域，旨在提供一种重现性好、干扰因素少、方便快捷的测定银杏叶中萜类内酯含量的HPLC-ELSD内标检测方法。该方法采用吡虫啉作为内标物，并采用HPLC-ELSD法测定萜类内酯中各组分并计算其含量。本发明可代替药典中测定银杏叶或银杏叶提取物中萜类内酯的检测方法。CN109406676ACN109406676A权利要求书1/1页1.一种测定银杏叶提取物中萜类内酯含量的方法，其特征在于所选内标物为吡虫啉。2.权利要求1所述的一种测定银杏叶提取物中萜类内酯含量的方法，其特征还在于采用HPLC-ELSD内标法测定。2CN109406676A说明书1/5页一种测定银杏叶提取物中萜类内酯含量的方法技术领域[0001]本发明涉及一种测定银杏叶提取物中萜类内酯含量的方法，属于化学检测领域。背景技术[0002]银杏叶提取物(Ginkgobilobaextract，GBE)是从银杏科银杏属植物银杏的干燥叶中提取纯化而成的一种淡黄色至棕褐色的粉状物质。其中主要含总黄酮醇苷及萜类内酯。银杏叶提取物具有扩张冠脉血管、脑血管，增加冠脉流量及脑血流量，改善心脑功能的作用。有改善脑缺血所产生的症状和记忆功能。有解除支气管平滑肌痉挛的作用，此作用可能与白果内酯的对血小板活化因子的拮抗有关。本品适用于治疗冠心病心绞痛、脑血管痉挛、脑供血不全、记忆力衰退等。也适用于支气管哮喘、老年性痴呆等疾病。银杏叶提取物中萜类内酯成分的含量测定一般采用药典方法，如中国药典的HPLC-ELSD外标法、欧洲药典的HPLC-RID对照法、美国药典的HPLC-ELSD外标法等。由于ELSD与RID检测器对检测条件要求较高，在一般实验室条件下，其检测结果精密度(峰面积或结果含量)难以达到RSD≤2％的要求，检测器稳定性较差。且对照品使用量较大，价格昂贵，检测成本较高。发明内容[0003]针对以上不足，本发明旨在提供一种重现性好、干扰因素少、方便快捷的测定银杏叶提取物中萜类内酯含量的HPLC-ELSD内标法。本发明采用吡虫啉作为内标物，内标物峰与供试品中待测成分及杂质峰均不重叠。[0004]为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种测定银杏叶提取物中萜类内酯含量的方法，依次包括下述步骤：[0005]步骤1：对照品溶液的制备：分别取白果内酯对照品、银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品和银杏内酯C对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含2mg、0.5mg、1.5mg、1mg的混合溶液，作为对照溶液。[0006]步骤2：另称取约60～100mg吡虫啉，精密称定，加80％甲醇溶解至100ml容量瓶中，加80％加醇至刻度，即得内标溶液。[0007]步骤3：供试品溶液的制备：取银杏叶提取物约0.15g，精密称定，加水10ml，置水浴中温热使溶散，加2％盐酸溶液2滴，用乙酸乙酯振摇4次(15ml、10ml、10ml、10ml)，合并提取液，用5％醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用乙酸乙酯10ml洗涤。合并乙酸乙酯提取液及洗涤液，用水洗涤2次，每次20ml，分取水液，用乙酸乙酯10ml洗涤，合并乙酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。[0008]步骤4：内标测定：分别精密吸取对照品溶液0.5ml及内标溶液0.5ml，混合均匀，作为1#内标校正用对照品溶液；分别精密吸取对照品溶液0.5ml、80％甲醇0.5ml及内标溶液1ml，混合均匀，作为2#内标校正用对照品溶液；分别精密吸取对照品溶液1ml、80％甲醇0.5ml及内标溶液0.5ml，混合均匀，作为3#内标校正用对照品溶液；精密吸取供试品溶液3CN109406676A说明书2/5页0.5ml及内标溶液0.5ml，混合均匀，作为内标法的供试品溶液。分别精密吸取1#、2#、3#对照溶液5～10μl，供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，照HPLC-ELSD法测定，用内标三点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量，总内脂等于白果内酯、银杏内酯A银杏内酯B和银杏内酯C的含量之和。[0009]步骤5：H