一种银杏叶提取物中有机酸含量测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106770865A(43)申请公布日2017.05.31(21)申请号201510826946.8(22)申请日2015.11.25(71)申请人云南康恩贝植物研究院有限公司地址650217云南省昆明市经开区希陶路1号(72)发明人乔洪翔刘华春任红蒋春黄海波陈君陈岑孔琼荣王莲王如伟(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图4页(54)发明名称一种银杏叶提取物中有机酸含量测定方法(57)摘要本发明公开了一种用于测定银杏叶提取物中有机酸含量的方法。该方法包括下列内容：银杏叶提取物样本的前处理、供试品溶液的制备、高效液相色谱分析等步骤。本发明在银杏叶提取物样本前处理过程中，用含牛血清白蛋白的水溶液进行超声提取，去除了原花青素的干扰；在供试品溶液的制备过程中，用含0.1％磷酸的水溶液进行制样，去除了部分杂峰的干扰，大大改善了色谱峰的色谱行为和分离效果。经上述方法分析后，可获得银杏叶提取物有机酸图谱，并可以同时定量莽草酸、没食子酸、原儿茶酸、6-羟基犬尿喹啉酸、对羟基苯甲酸等五种有机酸成分的含量。CN106770865ACN106770865A权利要求书1/1页1.一种银杏叶提取物的含量测定方法，包括如下步骤：(1)银杏叶提取物的前处理方法：取银杏叶提取物，用含牛血清白蛋白的水溶液超声提取，过滤；滤液浓缩干燥，得有机酸提取物；(2)供试品溶液的制备：有机酸提取物用含0.05～0.4％磷酸的水溶液溶解定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(3)对照品溶液的制备：精密称取莽草酸、没食子酸、原儿茶酸、6-羟基犬尿喹啉酸、对羟基苯甲酸的标准品适量，用流动相溶解，即得；(4)高效液相色谱分析：分别吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪，按如下色谱条件测定，得五种有机酸的对照品色谱图和供试品的色谱图；色谱条件为：固定相是以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；紫外检测器，检测波长0～6min为215nm，6～25min为254nm；柱温为30℃；进样量为10ul；流速为1.0ml/min；采用等度洗脱，流动相A的体积分数为3.5％，流动相B的体积分数为96.5％。2.根据权利要求1所述的银杏叶提取物的含量测定方法，其特征在于，所述的步骤(1)中，银杏叶提取物的前处理方法为，取银杏叶提取物100mg，用含0.1～10g/L牛血清白蛋白的水溶液5～100ml，20～70℃超声提取5min～3h，过滤；滤液浓缩干燥，得有机酸提取物。3.根据权利要求1或2所述的银杏叶提取物的含量测定方法，其特征在于，所述的步骤(1)中，银杏叶提取物的前处理方法为，取银杏叶提取物100mg，用含1g/L牛血清白蛋白的水溶液10ml，50℃超声提取1h，过滤；滤液浓缩干燥，得有机酸提取物。4.根据权利要求1所述的银杏叶提取物及其制剂的含量测定方法，其特征在于，所述的步骤(2)中供试品溶液的制备方法为，有机酸提取物用含0.1％磷酸的水溶液溶解并定容至10ml，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2CN106770865A说明书1/8页一种银杏叶提取物中有机酸含量测定方法技术领域[0001]本发明涉及一种用于银杏叶提取物中有机酸含量的测定方法。背景技术[0002]银杏叶为银杏科植物银杏(GinkgobilobaL.)的干燥叶，味微苦，性平，具有益心、活血止痛、敛肺平喘、化湿止泻的功效。银杏叶提取物临床上用于治疗心脑血管疾病和神经系统疾病。银杏叶提取物成分复杂，目前的质量控制指标仅有两类成分：黄酮醇苷类和内酯类，两者总含量为30％。另有7成成分未被列入质量标准中。已有文献报道，银杏叶提取物除了黄酮醇苷和内酯成分外，还含有原花青素、有机酸、双黄酮、异黄酮等成分。因此，为了逐步增加银杏叶提取物中的可测成分，逐步提高和完善银杏叶提取物的质量标准，对除黄酮醇苷和内酯成分之外的其他成分进行研究，就显得尤为重要。[0003]文献“高效液相色谱法测定银杏果中有机酸的含量”(分析科学学报,2011,27(3):336-338.)报道了白果中含有草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、乙酸、柠檬酸，并用一种色谱条件同时测定了这7种小分子有机酸。色谱条件流动相为3％甲醇-0.01mol/LK2HPO4，即用到了缓冲盐体系。[0004]本发明人团队在研究中发现，虽然白果中含有上述7种小分子有机酸，但银杏叶提取物中却不含这些有机酸，但含有至少5种其他的有机酸类成分，包括莽草酸、没食子酸、原儿茶酸、6-羟基犬尿喹啉酸(6-HKA)和对羟基苯甲酸。这些有机酸类成分均具有较好的生物活性：莽草酸具有抗炎镇痛、抗肿瘤、抗血栓、抗HIV等作用，是合成抗禽流感病毒和甲